乙肝病毒感染产妇IL-12、IL-18表达与胎儿宫内感染的相关性分析

孙久江,吴新红

（山东省郓城县杨庄集镇中心卫生院,山东 菏泽 274717）

婴幼儿是乙肝肝炎病毒（HBV）高危人群，母婴传播是重要途径，通过母体垂直传播感染胎儿，乙肝宫内感染是乙肝高发区严峻的公共卫生问题。研究表明[1]，垂直传播婴儿几乎都会发展为慢性HBV携带者，其中约有20%患者会进展为肝硬化和肝癌。所以，控制母婴传播是控制HBV最重要内容。而HBV在体内持续感染是由病毒和机体免疫状态两方面组成的，目前众多的报道均主张机体能否清除病毒和体内免疫反应是以Th1型还是以Th2型为主。Th1型可增强宿主抵抗微生物感染力，而Th2型则能反应感染的进展和慢性化有关。本次研究就通过对HBV宫内感染中的IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ水平特点和相关性，以期寻找最佳的治疗方案。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2014年2月～2017年2月93例血清乙肝表面抗原（HBsAg）阳性患者为研究对象，纳入标准均符合血清甲、丙、丁等肝炎系列检查阴性，无先天性免疫缺陷，无潜在的炎症相关因素，无内科、产科合并症和合并症，肝肾功能均正常。检测新生儿脐带血分成宫内感染和宫内未感染，然后选取同时期HBsAg阴性的45例正常孕妇为对照组。3组的临床资料，年龄、孕产次、孕周、体质量等方面比较差异无统计学意义，具有可比性，见表1。

表1 3组产妇临床资料情况比较（x±s）Table 1 Comparison of clinical data of 3 groups of parturients(x±s)

1.2 方法

1.2.1 产妇产前血清IL-12、IL-18检测方法 所有产妇均在分娩前采用流式细胞仪检测血清IL-12、IL-18，采用酶联免疫吸附法测定乙肝5项指标和细胞因子IL-4和IFN-γ水平。酶联免疫法测定步骤为：①样品准备。采集空腹血液于无菌离心管中，于室温下让血液自然凝固10～20 min，在旋转离心器中旋转（转速：2 000～3 000 r/min）离心20 min左右取上层血清作为检测样品，标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验；②样品保存。处理后的样品若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融；③检测。以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

1.2.2 新生儿乙肝五项检测方法 新生儿出生后，在联合免疫前测定脐血乙肝5项指标和脱氧核糖核酸（HBV-DNA）水平。乙肝五项采用酶联免疫法进行检测，具体步骤为：采集新生儿空腹血液，自然凝集30 min，取上层血清，将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照，及质控品，上水浴孵育60 min，然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止液完成反应部分，读数，根据数值来判断结果的阴性或阳性。宫内感染的标准为新生儿免疫接种前脐血清HBsAg、HBV的HBV-DNA为阳性者。

1.3 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行分析，将调查统计的内容作为变量，计量资料采用t检验和Pearson相关性检测，计数资料采用“x±s”进行单因素分析，以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 3组外周血清IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ情况比较对3组外周血清IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ情况比较得出，宫内感染组和宫内未感染组、对照组在IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ上比较差异有统计学意义（P＜0.05）；而宫内未感染组和对照组比较差异无统计学意义，见表2。

表2 3组外周血清IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ情况比较（x±s）Table 2 Comparison of IL-12,IL-18,IL-4 and IFN-4 in peripheral blood of 3 groups(x±s)

2.2 3组外周血清IL-12、IL-2、IL-4和IFN-γ之间相关性情况比较 对3组外周血清IL-12、IL-2、IL-4、IFN-γ之间相关性情况比较得出，IL-12、IL-2和IL-4均呈显著负相关，见表3。

表3 3组在IL-12、IL-4和IFN-γ相关性情况比较Table 3 The correlations between the three groups in IL-12,IL-4 and IFN-comparisons were compared

2.3 3组外周血清IL-18、IL-8、IL-4、IFN-γ之间相关性情况比较 3组外周血清IL-18、IL-8和IFN-γ均为显著正相关，而IL-8和IL-4两者之间均为显著负相关，见表4。

表4 3组在IL-18、IL-8和IFN-γ相关性情况比较Table 4 The correlations of the three groups in IL-18,IL-8 and IFN-comparisons were compared

2.4 3组外周血清IL-12、IL-18相关性情况比较 3组产妇外周血清IL-18、IL-12为显著负相关，见表5。

表5 3组在IL-12、IL-18相关性情况比较Table 5 The correlation of IL-12 and IL-18 between the 3 groups was compared

3 讨论

乙肝病毒属于一种非致细胞病变的DNA病毒，其临床多样化取决于宿主免疫反应，如急性、自限性肝炎结果取决于强的CD4+、CD8+细胞反应，以Th1型反应为主。研究[2]指出，HBsAg清除后恢复阶段有很强病毒T细胞反应，而慢性者则仅有较弱甚至不能检测的HBV，故T细胞反应弱是HBV持续存在并高水平复制的原因。

IL-12由活化的单核细胞、巨噬细胞、树突细胞等组成，是临床上常见的促炎症细胞因子，报道[3]通过对动物试验指出，使用IL-12后小鼠的IFN-γ分泌可彻底抑制HBV在肝脏内复制，可恢复T细胞病毒抗原的低反应性。而结合本次研究结果看出，宫内感染者的IL-12水平和宫内未感染组、对照组水平比较差异有统计学意义，而宫内未感染组、对照组之间IL-12水平比较差异无统计学意义，这可能是宫内感染者体内的Th1受体等不足从而激活机体免疫功能缺陷，抗感染功能下降，不能有效的防御和清除HBV感染，促进机体处于免疫耐受状态[4]。而从相关性情况看，IL-12和IFN-γ为正相关，而和其他的为负相关。

IL-18的生物学活性和IL-12类似，但是在诱导IFN-γ上较IL-12好。其结构是又IL-1类巨噬细胞分泌[5]，能增加培养T细胞中IL-12的产量，通过依赖IL-12促进T细胞增殖。从本次研究结果看出，宫内感染者的IL-18明显低于未感染者和对照组患者，且两者IL-18和IFN-γ、IL-4水平为正相关，这说明了IL-18可使Th1/Th2细胞免疫失衡扩大，机体抗病毒能力减弱，HBV复制活跃，且IL-18低水平复制可能参与了HBV宫内感染的扩散[6]。

本组资料显示，宫内感染组和宫内未感染组、对照组在IL-12、IL-18、IL-4和IFN-γ上比较差异有统计学意义（P＜0.05），而宫内未感染组和对照组比较差异无统计学意义；另外IL-12、IL-18和IL-4均呈显著负相关，和IFN-γ均为显著正相关，而IL-12、IL-18两者IL-4和IFN-γ之间均为显著负相关。而IL-12、IL-18之间则为显著的正相关。

综上所述，做好乙肝病毒感染孕妇的IL-12、IL-18指标水平检测，并根据检测结果给予产妇进行适当治疗，指导孕妇及家属做出合理的选择，以降低新生儿的宫内感染风险，对提高新生儿质量，具有重要意义。