一种新型过氧化物抑菌及杀菌效果试验

赵彦华，张纪兵，薛晖

（1.江苏省淡水水产研究所，江苏 南京 210017；2.南京智亿生物技术有限公司，江苏 南京 211100）

嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）属于弧菌科，气单胞菌属，是嗜温、有动力的气单胞菌群，是一种典型人-兽-鱼共患病病原[1]。嗜水气单胞菌目前已经在自然界被广泛分离到，如在淡海水鱼[2-3]，淡水虾、蟹类[4]和养殖蛙体内[5-6]，被确认为多种水产动物重要的病原菌，给养殖生产带来了巨大的经济损失。双氧水作为氧化性消毒剂，含有大量的过氧化氢，使用过程中能够迅速释放大量新生氧，对细菌组分发生氧化作用，干扰其酶系统从而发挥抑菌及杀菌作用[7]。近年来双氧水作为控制鱼类病原体的一种化学药剂，在水产养殖方面得到了极高的重视[8]。该试验的目的在于测试一种新型过氧化物在增氧的同时，对池塘水中细菌的抑制和杀灭效果。

1 材料与方法

1.1 材料

新型过氧化物（Na2SO2·Nacl·H2O2），由南京智亿生物技术有限公司生产，LB营养肉汤培养基及胰蛋白胨生理盐水溶液购自环凯生物制品有限公司，3M细菌培养计数片购自南京迈默瑞生物技术有限公司，供试菌株嗜水气单胞菌标准菌株购自中国农业微生物保存中心。

1.2 方法

1.2.1 细菌悬液的制备 将嗜水气单胞菌菌株用LB营养肉汤培养基进行摇床增菌培养，28℃，180 rad/min，培养5 h，离心，弃上清，用灭菌胰蛋白胨生理盐水溶液洗下菌苔，制成菌悬液，按照倍比稀释的方法，进行细菌计数，调整浓度，备用。

1.2.2 使用浓度为0.1 g/mL时抑菌效果试验 按照使用说明书，将新型过氧化物使用浓度调整为说明书用量十分之一，即0.1 g/mL加入到菌悬液中，每隔15 min，吸取菌悬液并按照倍比稀释方法进行稀释，稀释后不同浓度菌悬液各吸取1 mL加入3M细菌培养计数试纸片上进行压片，连续监测6 h，试纸片放入28℃恒温培养箱连续培养48 h进行细菌计数。

1.2.3 使用浓度为1 g/mL时杀菌效果试验 将新型过氧化物按照使用浓度调整，即1 g/mL加入到菌悬液中，每隔15 min，吸取菌悬液并按照倍比稀释方法进行稀释，稀释后不同浓度菌悬液各吸取1 mL加入3M细菌培养计数试纸片上进行压片，连续监测6 h，试纸片放入28℃恒温培养箱连续培养48 h进行细菌计数。

2 结果与分析

2.1 细菌悬液制备

嗜水气单胞菌经肉汤培养基进行扩大培养后，制得菌悬液浓度为8.2×106CFU/mL。

2.2 抑菌试验结果

过氧化物使用浓度为0.1 g/L时，检测结果如表1所示，当加入过氧化物2 h 45 min时，细菌浓度最低，且浓度为3.1×106CFU/mL，细菌浓度下降明显，随着时间推移，细菌浓度随即增加，表明此浓度抑菌效果较好，但并不能完全杀灭菌体。

2.3 杀菌试验结果

过氧化物使用浓度为1 g/L时，检测结果如表2所示，当加入过氧化物1 h 15 min时，细菌全部杀死，表明该过氧化物杀菌效果明显。

表1 过氧化物抑菌试验结果

表2 过氧化物杀菌试验结果

2.4 抑菌及杀菌曲线图

如图1所示，A为抑菌曲线，B为杀菌曲线，随着时间的推移，曲线A中细菌总数在2 h 45 min中时浓度最低，随后细菌浓度上升；曲线B随着时间的推移，细菌在1 h 15 min时被完全杀死，细菌数为零，且随着时间的推移，并未检测到细菌的存在。

图1 过氧化物抑菌及杀菌曲线

3 讨论

近年来，随着水产养殖业的高密度、集约化饲养及种质资源的退化，水产病害日益增多，抗生素的过量使用，不仅仅造成耐药株的产生，而且还会出现药物残留等食品安全问题，消毒剂不仅可以防治病害，又可以避免药物残留等问题的出现，因此在水产养殖中广泛使用。池塘消毒作为养殖的第一步，也是最重要的一步，如何挑选一种效果好，用量少，无污染，无残留以及不易产生耐药性的消毒剂是制约水产养殖业发展的一大问题。

嗜水气单胞菌普遍存在于水环境中，是重要的水生病原菌之一。池塘养殖水环境，细菌总数一般为106CFU/mL，因此，该试验模拟水环境中细菌总数，培养嗜水气单胞菌调整其浓度为8.2×106CFU/mL，通过固体过氧化物的溶解，进行氧化作用抑制和杀灭细菌。该次试验通过低浓度及正常浓度过氧化物的使用，来验证一种新型过氧化物的抑菌及杀菌效果，为水产养殖中使用消毒剂提供了一定的参考。