黑米花色苷体外抑菌作用研究

□ 赵丽艳 陈宇飞 吉林工商学院粮食学院

随着社会的快速进步和经济的高速发展，人们对自身健康日益关注，天然食品添加剂的研究范围也不断扩大。花色苷是一种安全无毒的水溶性天然色素，具有抑制肥胖，增强人体免疫力，增强体质，延缓衰老与提升视力等多种作用[1]，并逐渐被广泛用在食品、化妆品、医药等方面。目前，花色苷提取、纯化工艺和稳定性的研究较为成熟，但作为抑菌物质也有着特殊的优越性，如不产生耐药性、不会导致环境污染[2]。本研究旨在通过黑米花色苷体外抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的研究，为黑米的深入开发利用和相关农产品的功能开发提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

黑米花色苷通过乙醇水溶液浸提法提取；大肠杆菌、金黄色葡萄球菌由吉林工商学院微生物实验室提供。

全自动高压灭菌锅，驭诺仪器（上海）有限公司；超净工作台（SW-CJIFD），苏州精华设备责任有限公司；电热恒温培养箱（DHP-9162），一恒科技（上海）有限公司；恒温培养振荡机，北京海天友诚科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 牛肉膏蛋白胨培养基的制备

牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，（琼脂20 g），水1 000 mL，pH 7.2～ 7.4，121 ℃灭菌 20 min，用于培养大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。

1.2.2 供试菌液的制备

在无菌条件下，将活化后的供试菌种接种到液体培养基中，于37 ℃摇床培养12～16 h（培养到对数长期），备用。

1.2.3 黑米花色苷的抑菌作用

在无菌条件下，将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基凝固冷却后，分别加入0.2 mL菌液，并涂布均匀。将无菌滤纸片（直径6 mm）分别浸泡于黑米花色苷提取液、75%乙醇溶液中，待浸透后，用镊子夹取，分别放入涂布菌液的培养基表面上。静置片刻，倒置于37 ℃培养箱培养36 h后，测量抑菌圈直径（mm）。

1.2.4 最小抑菌浓度的测定

将已制备好的黑米花色苷浓缩液用二倍稀释法制成不同浓度梯度的溶液，分别取1 mL加入到装有供试菌株的培养基中，37 ℃培养36 h，观察其生长情况，以不长菌的稀释液浓度为最小抑菌浓度。

2 结果与分析

2.1 黑米花色苷的抑菌效果

黑米花色苷的抑菌效果（图1）表明黑米花色苷对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有一定程度的抑制效果，且对大肠杆菌的抑制效果（抑菌圈直径为17.8 mm）要强于金黄色葡萄球菌（抑菌圈直径为8.2 mm）。在这两种菌的对照平板中，没有检测到抑菌圈，这与张曼莉[3]报道的黑米花青素抑菌活性结果基本一致。

图1 黑米花色苷的抑菌效果

2.2 最小抑菌浓度的测定

采用二倍稀释法测定黑米花色苷对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度，从表1可以看出，黑米花色苷对这两种细菌的最小抑菌浓度分别为大肠杆菌1.5 mg/mL、金黄色葡萄球菌6 mg/mL，抑菌效果随着花色苷浓度的增加而增强。

表1 黑米花色苷的最小抑菌浓度

3 结论

黑米花色苷对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有一定程度的抑制效果，且对大肠杆菌的抑制效果更强。黑米花色苷对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为1.5、6 mg/mL，随着花色苷浓度的增加，抑菌效果增强，这为黑米的功能研究与开发提供了一定的数据参考。