一起由鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌混合感染引起食物中毒的实验室检测与分析

潘银玲

（新疆乌鲁木齐市米东区疾病预防控制中心，新疆 乌鲁木齐 831400）

0 引言

沙门氏菌属于肠杆菌科中常见的一个重要的病原性菌属，除引起伤寒、副伤寒疾病外，还可以引起人类细菌性食物中毒[1]。金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌，属于葡萄球菌属。其致病性并不是通过菌体自身，致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶[2]。本事件就是患者食用了被沙门氏菌和金黄色葡萄球菌肠毒素污染的食品引起食物中毒。

1 流行病学调查

1.1 临床症状。2021年4月30日22点左右，程氏父子及朋友一行4人在本市某餐饮店就餐，主要食用了店主自制的卤猪耳朵和卤鸡。5月1日凌晨（具体时间患者自述不详）4名就餐者先后出现头疼、恶心、腹痛（脐周阵痛）、腹泻（＞10次/24 h）、发热39℃～42℃等程度不同的临床症状，就医后诊断为急性肠胃炎。通过及时治疗病情好转已出院。

1.2 样本采集。5月1日上午10时本中心接到报告后迅速组织流调人员和采样人员赶往现场进行采样。①将剩余的卤猪耳朵和和卤鸡各采500 g；②将生食抹布和熟食抹布各剪取1块（25 g）；③将生食菜刀、熟食菜刀的涂抹棉拭子各采1份；④将生食菜板和熟食菜板的涂抹棉拭子各采1份。上述8份样本盛装于灭菌瓶内，立即送往实验室检测；⑤收集程氏父子在治疗前留存的2份腹泻标本（另两名患者已使用过抗生素未采样）用运送箱运送至实验室进行检测。

1.3 实验室检测

1.3.1 仪器：智能生化培养箱SPH-250（上海鸿都电子科技有限公司），新华牌立式灭菌器LMQ.C（山东新华医疗器械股份有限公司），奥林巴斯光学显微镜（日本奥林巴斯公司）

1.3.2 试剂：7.5%氯化钠肉汤，GN增菌液，亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC），脑心浸出液肉汤（BHI），血平板，肠道菌增菌肉汤，SS琼脂培养基，沙门氏显色培养基，志贺氏显色培养基，三糖铁琼脂，微量生化试剂盒均由北京路桥技术股份有限公司生产。冻干兔血浆由上海瑞楚生物科技有限公司生产。革兰氏染液由珠海贝索生物有限公司生产。沙门氏菌属诊断血清由兰州生物制品研究所生产。以上试剂和诊断血清均在有效期内使用。

1.3.3 检测方法：根据《食品安全国家标准 食品微生物学检验》（GB4789-2016）系列标准[3]对采集的样本进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌检测。①增菌培养。首先将2份腹泻标本直接划线接种选择性琼脂SS平板和志贺氏显色培养基，于37℃培养24 h。再将餐饮店采集的8份样本逐一接种到亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、GN增菌液（志贺氏菌41.5℃厌氧培养20 h）、7.5%氯化钠肉汤、肠道菌增菌肉汤中于37℃培养24 h；②分离培养。直接划线培养的2份粪便标本志贺氏显色培养基上无可疑菌落生长。但SS平板上长有可疑菌落。增菌液SC和7.5%氯化钠肉汤呈均匀混浊生长，其余增菌液清亮。取SC增菌液和7.5%氯化钠增菌液分别转种于沙门氏显色培养基和血平板上，于37℃培养24 h。

2 结果

2.1 培养特性。直接分离的2份腹泻标本、增菌培养的2份卤制品和2份生、熟食抹布6份样本中都分离出相似的可疑菌落，菌落形态为SS平板上长有直径约1～2 mm，圆形凸起，光滑湿润，多数无色透明，少数中心带黑色的菌落。沙门氏显色培养基上长有大小不一的紫色菌落，还发现转种于血平板上的生食抹布和卤猪耳朵也长有相似的可疑菌落，菌落形态为菌落较大，圆形凸起，光滑湿润，金黄色略白，菌落周围可见透明溶血圈。

2.2 镜检。挑取直接划线平板SS或沙门氏显色培养基上可疑菌落进行革兰氏染色，镜检为G—无芽孢杆菌。挑取血平板上可疑菌落染色镜检为G+葡萄球菌。

2.3 沙门氏菌生化试验，见表1。

表1 可疑菌落生化反应结果

2.4 沙门氏菌血清学鉴定，见表2。根据菌落形态特征及染色镜检，生化试验，血清学试验，判定6份样本均检出沙门氏菌。查沙门氏菌型抗原成分表属于鼠伤寒沙门氏菌。

表2 可疑菌血清凝集试验结果

2.5 金黄色葡萄球菌确证鉴定。血浆凝固酶试验：挑取生食抹布和猪耳朵血平板上各5个可疑菌落分别接种到5 mL脑心浸出液（BHI）中于36℃培养24 h。取BHI培养物0.3 mL加入0.5 mL血浆（用无菌蒸馏水0.5 mL将冻干血浆溶解）中，震荡摇匀，置37℃水浴箱内，每半小时观察1次，结果观察到1小时后开始凝固，1个半小时后将试管倾斜，呈现凝块，判定为血浆凝固酶阳性，同时以血浆凝固酶阳性菌株的培养物作对照。

2.6 葡萄球菌肠毒素检验。按GB4789.10-2016附录B葡萄球菌毒素检验。直接浓缩法从以上2份金黄色葡萄球菌血浆凝固酶阳性菌中提取肠毒素，用玻片双相琼脂扩散法检测肠毒素为A+D型。

3 结论

根据流行病学调查和以上实验室鉴定，分析此次中毒事件是由鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌肠毒素混合污染食物所致。沙门氏菌是革兰氏阴性杆菌，是食品、水源及畜产品的重要污染菌。沙门氏菌属种类繁多，其中引起食物中毒的主要有鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌。沙门氏菌进入肠道后大量繁殖，除使肠道黏膜发炎外，大量活菌释放的内毒素还会引起机体中毒[4]。因金黄色葡萄球菌肠毒素耐热性极强，100℃加热30分钟都不能完全破坏肠毒素，人若进食含有肠毒素的葡萄球菌污染的食物即可发生食物中毒[5]。

本案中，店主马某自述4月30日13点左右卤制了一锅猪耳朵和鸡肉，卤熟后未放置冰箱保存，直到当日晚上22点左右程氏父子等4人来店里就餐，食用了高温环境下（当日最高气温达32℃）存放近9小时的卤制品，于5月1日凌晨相继出现疑似食物中毒症状，这很有可能食物被细菌污染导致致病菌大量繁殖，产生了肠毒素，引起食物中毒[6]。该餐饮店卫生条件差，没有定期做清洁消毒工作。盛放食品的容器无生熟标识，存在交叉感染隐患，食品从业人员卫生意识差，缺乏基本的食品安全知识。建议卫生监管部门加强对食品安全知识的宣传力度，加强对餐饮服务业的监管力度，完善食品加工、储存等环节的监督检查制度。有效的控制食源性疾病的发生，真正做到防患于未然。

4 体会

4.1 在实验室检测中常采用腹泻物直接分离与增菌后分离相结合的方法，一是可以提早出具检测结果，再就是增菌培养可以提高目的菌的敏感性。两者相互补充，既提高检出率，又缩短检测周期，为处理突发公共卫生事件争取宝贵时间。

4.2 对培养基的选择，没有任何一种培养基可以全面的保持所有食品的基质，所以适当的做法就是使用培养基平行的进行试验，以提高检出率。

4.3 采样时应尽可能采集剩余的食物、患者的排泄物以及食品操作间的涂抹棉拭子送实验室检测，以形成完整的证据链。