穴位按摩对难治性癫痫大鼠学习记忆能力及海马细胞因子的影响

华显娇

癫痫是一种因神经元同步化异常放电导致惊厥反复发作的神经系统疾病，通常采取药物治疗。常规抗癫痫药物对癫痫的治疗会产生明显的作用效果，但是仍有20%～30%癫痫患者接受药物治疗后，因抗药性或其他原因而出现癫痫反复发作难以控制，导致病程迁延并发展成为难治性癫痫(Intractable epilepsy，IE)[1，2]。癫痫的反复发作会导致认知功能障碍，其中主要表现为学习记忆能力下降[3]，严重影响患者的生活质量。因此，积极寻找改善癫痫患者学习记忆的方法就显得尤为重要。穴位按摩是中医护理的主要手段，通过按摩人体特定穴位，来激发体内的经络之气，达到祛邪扶正、调整功能，治疗疾病的目的。百会穴与足三里是提高认知能力的常见穴位[4]，但是否对癫痫学习记忆能力产生作用，还未见文献报道。因此，本研究通过建立大鼠IE模型，按摩百会穴与足三里干预，水迷宫评估学习记忆能力的变化，并探讨其作用的可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物SD大鼠，SPF级，体质量150～200 g，购买于河南省实验动物中心，许可证号：SCXK(豫)2019-0003。统一饲养，动物自由饮食、饮水，室内温度保持在20～25 ℃，空气相对湿度保持在40%～50%。

1.1.2 实验药品和试剂海人酸(美国Sigma公司生产)；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒、白细胞介素-1β(IL-1β)试剂盒、白细胞介素-6(IL-6)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，试剂批号皆为20190915等。

1.1.3 实验仪器和设备DW-2000大鼠脑立体定位仪(四川成都泰盟仪器有限公司)；WMT-100型Morris水迷宫(四川成都泰盟仪器有限公司)；HBS-1096C酶标分析仪(南京德铁实验设备有限公司)等。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组与建模选取60只SPF级雄性大鼠，随机分为空白组、模型组、干预组，每组20只。其中空白组只手术，不给药。模型组与干预组参照文献[5]建立癫痫模型，其中模型组不给予任何干预，常规饲养。干预组建模后采取百会穴与足三里穴按摩干预，具体干预过程参照文献[4]，连续14 d。

1.2.2 Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力按摩干预14 d后，参照文献[6]检测各组大鼠学习记忆水平。

1.2.3 酶联免疫法(ELISA)检测海马细胞因子水迷宫实验结束后，立即断头处死大鼠，打开颅骨，取出脑组织，然后快速在冰面上通过手术刀剥离大鼠海马组织，制成10%的组织匀浆，离心后取上清液检测。严格按照试剂盒使用说明，采用ELISA法检测细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β含量。

2 结果

2.1 Morris水迷宫实验结果

2.1.1 定位航行实验结果定位航行实验结果显示，各组逃避潜伏期的时间随训练时间的延长逐渐缩短。与对照组比较，模型组逃避潜伏期的时间明显延长，两者差异有统计学意义(P<0.05)；而与模型组比较，干预组逃避潜伏期的时间明显缩短，两者差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组大鼠定位航行实验结果比较 (只，

2.1.2 空间探索实验结果空间探索实验结果显示，与对照组比较，模型组目标象限停留的时间与穿越平台的次数都明显减少，两者差异有统计学意义(P<0.05)；而与模型组比较，干预组目标平台象限停留的时间与穿越平台的次数都明显增加，两者差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组大鼠空间探索实验结果比较 (只，

2.2 海马细胞因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)含量与对照组比较，模型组大鼠海马组织TNF-α、IL-6和IL-1β含量明显升高(P<0.05)；与模型组比较，干预组大鼠海马组织TNF-α、IL-6和IL-1β含量明显降低(P<0.05)。见表3。

表3 3组大鼠TNF-α、IL-6和IL-1β含量比较 (只，

3 讨论

据统计学数据显示全球癫痫患者的数量接近7000万，其中我国癫痫患者更以每年40万的速度增长[7]。癫痫的反复发作通常会导致学习记忆功能障碍，但具体机制不清。百会穴是督脉、小肠经、三焦经、大肠经、胆经、胃经、膀胱经的交会穴。因此，百会穴对脑与脊髓的调节有举足轻重的作用，具有滋养脑髓、醒脑开窍的功效。足三里属于下合穴，汇聚了天部精华。因此，将百会穴与足三里配合使用符合远近穴位相配的原则，具有健脑调神、固本扶正的作用[8，9]。通过本研究发现经过按摩百会穴与足三里后大鼠逃避潜伏期的时间明显缩短，而目标平台象限停留的时间与穿越平台的次数明显增加，这表明穴位按摩干预提高了癫痫大鼠学习记忆能力。

免疫炎症反应被认为是癫痫产生的一种潜在机制，癫痫的形成是由于各种原因导致的炎症反应，通过炎症反应引起神经元兴奋性升高，异常放电，引起癫痫发作；同时癫痫发作释放的大量炎性因子，导致神经系统损伤加重，引起癫痫反复发作，形成IE的病理基础[10]。TNF-α、IL-6和IL-1β是常见的炎性因子，是机体组织炎性反应的标志。通过本实验研究发现干预组海马组织TNF-α、IL-6和IL-1β表达明显降低，说明癫痫大鼠海马组织炎性反应降低，海马神经元损伤减少。

综上所述，按摩百会穴与足三里穴能够明显提高IE大鼠学习记忆能力水平，其作用机制可能是通过抑制海马组织内的炎性反应来实现的。