蝉花多糖对肉鸡脂质代谢和免疫功能的影响

李瑞萍，刘长国，张 硕 ，董丽艳，王秋霞，徐时湘，李国勤，田 勇，柴一秋，刘素贞*，卢立志*

(1.浙江农林大学 动物科技学院，浙江 杭州 311300；2.浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所，浙江 杭州 310021；3.温州科技职业学院 动物科学学院，浙江 温州 325000；4.浙江省亚热带作物研究所 温州市虫生真菌资源研究与开发重点实验室，浙江 温州 325005)

从国家实施减抗政策以来，养鸡业从提高生物安全、研究新型饲料添加剂替抗等方面来改善养鸡业的养殖现状。日前，养殖场采用的替抗产品有微生态制剂、中草药、植物提取物等。其中，中草药中的蝉花备受专家学者关注，其粗多糖含量占比达到2.27%～3.58%[1]，含有的多糖成分在有效成分中占比达到21.73%[2]。近年来，将蝉花多糖应用于小鼠[3]、大鼠[4]、果蝇[5]的研究均有报道，研究表明，蝉花多糖具有促进机体免疫调节[6]和抗肿瘤[7]等作用。本课题组前期的研究结果表明，蝉花多糖在提高肉鸡体质量、降低料重比和鸡新城疫抗体水平方面有积极作用[8-9]。但蝉花多糖对肉鸡脂质代谢和免疫相关生化指标的报道不尽全面。因此，本试验以雁荡麻鸡为研究对象，探讨饲粮中添加蝉花多糖对鸡脂质代谢和免疫功能的影响，为提高鸡健康水平和改善肉品质提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料试验所用蝉花多糖由浙江省亚热带作物研究所提供，实验室自主栽培蝉花虫草子实体，通过实验室工艺手段干燥即得蝉花虫草粗多糖粉末，再经过大孔树脂法和去蛋白法(Sevag 法)分离得到蝉花多糖[10]。杆菌肽锌(批号：P181013)，由绿康生化有限公司提供。鸡新城疫活疫苗La Sota株由博美莱生物制品有限公司提供。

1.2 试验动物与试验设计将购自浙江绿雁有限公司的1日龄雁荡麻鸡270随机分为6组，公母各半，每组3个重复，每个重复15只，以每个重复为单位单笼饲养。设置空白对照组(Ⅰ组)、免疫对照组(Ⅱ组)、抗生素对照组(Ⅲ组)和3个试验组(Ⅳ～Ⅵ组)，按照表1方案，根据每组鸡的平均体质量按照灌服剂量计算添加剂剂量，每天14:00对每只试验鸡(1次/d)进行灌服，灌服试验时间分别为11～17日龄和25～31日龄。

表1 雁荡麻鸡灌服添加剂成分及剂量

1.3 饲养管理与试验饲粮试验前对鸡舍进行消毒，2019年5月在温州种子种苗科技园进行试验，采用双层笼养。日常饲养采用常规消毒、自由饮食、自然光照和通风。雁荡麻鸡饲喂无抗饲料(不含药物成分)，饲粮成分见表2。Ⅱ～Ⅵ组在14，28日龄进行新城疫点眼免疫(除Ⅰ组外)，空白对照组(Ⅰ组)用等量生理盐水点眼。试验从1日龄起至42日龄结束。

表2 无抗基础饲粮组成及营养水平 %

1.4 测定指标及方法

1.4.1血液生化和免疫指标 试验末期，每组随机抽取18只试验鸡(每个重复6只)，静脉采血，3 000 r/min 离心15 min后，分离血清并放置-20℃保存。血清脂质代谢指标，包括总蛋白(TP)、总胆固醇(TC)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、甘油三酯(TG)、肌酐(CREA)，采用北京华英生物技术研究所的比色试剂盒和迈瑞BS-420全自动生化仪检测；血清免疫指标，包括免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、补体C3(C3)、补体C4(C4)含量，采用北京华英生物技术研究所的比色试剂盒，全自动生化仪(迈瑞BS-420)测定；干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)含量采用北京华英生物技术研究所的酶免试剂盒，酶标分析仪(华为德朗DR-200BS)测定。

1.4.2免疫器官指数 试验鸡于42日龄屠宰，无菌采取脾脏、法氏囊等免疫器官，测质量并记录。免疫器官指数 = 器官质量/试验鸡活体空腹体质量。

2 结果

2.1 蝉花多糖对雁荡麻鸡血清脂质代谢相关指标的影响由表3可知，Ⅳ～Ⅵ组血清中TC含量低于Ⅰ～Ⅲ组，且显著低于Ⅲ组(P<0.05)，Ⅳ组TC含量显著低于Ⅰ～Ⅲ组(P<0.05)，同时，Ⅰ、Ⅱ组TC含量显著低于Ⅲ组(P<0.05)；Ⅴ、Ⅵ组血清中TP含量高于Ⅰ～Ⅲ组，其中Ⅴ组TP含量显著高于Ⅰ～Ⅲ组(P<0.05)，Ⅵ组TP含量显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05)；Ⅴ、Ⅵ组血清中GLB含量高于Ⅰ～Ⅲ组，其中Ⅴ组GLB含量显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05)，Ⅵ组GLB含量显著高于Ⅰ组(P<0.05)，Ⅲ组TP、GLB含量高于Ⅰ、Ⅱ组，但差异不显著(P>0.05)；Ⅳ～Ⅵ组血清中ALB含量高于Ⅰ～Ⅲ组，CREA含量低于Ⅰ～Ⅲ组，但差异不显著(P>0.05)；Ⅳ～Ⅵ组血清中TG含量低于Ⅰ～Ⅲ组，其中Ⅳ组TG含量显著低于Ⅰ组(P<0.05)，Ⅲ组TG含量低于Ⅰ、Ⅱ组，但差异不显著(P>0.05)。

2.2 蝉花多糖对雁荡麻鸡免疫器官指数的影响由表4可知，42日龄，蝉花多糖未对试验鸡的脾脏指数和法氏囊指数产生显著性影响(P>0.05)，但从数值上发现，Ⅴ组脾脏指数高于Ⅲ组，Ⅳ～Ⅵ组法氏囊指数高于Ⅰ～Ⅲ组。

2.3 蝉花多糖对雁荡麻鸡免疫相关生化指标的影响由表5可知，Ⅳ～Ⅵ组IgA含量高于Ⅰ～Ⅲ组，Ⅴ组在各组中IgA含量最高，较Ⅰ～Ⅲ组分别高出12.0%，12.0%，7.4%，且与Ⅰ、Ⅱ组存在显著性差异(P<0.05))；Ⅳ～Ⅵ组IgG含量高于Ⅰ～Ⅲ组(P>0.05)；Ⅳ组、Ⅵ组C3含量显著高于Ⅰ组(P<0.05)，Ⅴ组C3含量显著高于Ⅰ～Ⅲ组(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ组C3含量显著高于Ⅰ组(P<0.05)；Ⅳ组C4含量显著高于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.05)。

表3 蝉花多糖对雁荡麻鸡血清脂质代谢相关指标的影响

表4 蝉花多糖对42日龄雁荡麻鸡免疫器官指数的影响 mg/g

Ⅳ、Ⅴ组IFN-γ含量显著高于Ⅱ组(P<0.05)，Ⅳ～Ⅵ组IFN-γ含量显著高于Ⅲ组(P<0.05)，同时Ⅰ组IFN-γ含量显著高于Ⅲ组(P<0.05)；Ⅳ组TNF-α含量显著高于Ⅰ～Ⅲ组(P<0.05)，Ⅴ组TNF-α含量显著高于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)，Ⅵ组TNF-α含量显著高于Ⅲ组(P<0.05)，同时Ⅰ组TNF-α含量显著高于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)；Ⅳ～Ⅵ组IL-2含量显著高于Ⅰ～Ⅲ组(P<0.05)，Ⅰ、Ⅱ组IL-2含量显著高于Ⅲ组(P<0.05)；Ⅴ、Ⅵ组IL-4含量高于Ⅰ、Ⅱ组，且与Ⅱ组存在显著性差异(P<0.05)，Ⅲ组IL-4含量显著高于Ⅰ、Ⅱ组(P<0.05)。

表5 蝉花多糖对42日龄雁荡麻鸡免疫相关生化指标的影响

3 讨论

3.1 蝉花多糖对雁荡麻鸡血清脂质代谢的影响机体血清中TC和TG的含量是反映机体内脂类合成和代谢之间平衡的重要指标[11]。TP包括ALB和GLB，ALB负责运输代谢物、调节被运输物质以及维持血液胶体渗透压的作用，GLB则能增强机体抵抗疾病能力，血清中TP含量的升高对机体免疫力和代谢能力有积极影响[12]。本试验中，灌喂蝉花多糖的试验鸡TC、TG含量低于空白对照组、免疫对照组和抗生素对照组。LIU等[13]研究表明，机体内TC[14]、TG水平越低对机体体内脂质代谢越有利。蝉花多糖作为饲料添加剂可能有利于肉鸡的脂质代谢。类似于黄芪多糖能促进机体脂肪沉积，提高血清中TP的水平[15]。然而中药多糖对机体脂质合成和代谢能力发挥作用的机制还需要进一步研究。综合各组脂质代谢数值，蝉花多糖中剂量组(50 mg/kg)血清中TP、GLB、ALB和CREA均有所增多，其脂质代谢能力在各组中最佳。另有研究表明，山黄粉和黄芪多糖能促进动物体内蛋白质的消化吸收和代谢沉积能力[16]。这与本试验的结果类似，说明中草药多糖对动物的脂质代谢水平能产生积极影响，从而间接提高动物的生长性能和健康水平。

3.2 蝉花多糖对雁荡麻鸡免疫功能的影响

3.2.1蝉花多糖对雁荡麻鸡免疫器官指数的影响 禽类的免疫功能直接影响机体的生长性能，法氏囊、脾脏是禽类的主要免疫器官[17]，免疫器官指数可作为评判机体免疫功能的初步依据[18]。李思迪等[19]研究表明，蝉花复方能提高小鼠的胸腺及脾指数。罗靖璠[20]的研究表明，随着灌喂小鼠的蝉花菌核和子实体剂量增大，脾指数也在增加。本试验中脾脏和法氏囊指数均未有显著性差异，但添加蝉花多糖的试验鸡脾脏指数高于抗生素对照组，法氏囊指数略高于空白对照组、免疫对照组和抗生素对照组，说明在鸡的生长中添加蝉花多糖对免疫器官发育有一定的积极影响。有研究报道，多糖能正向促进禽类免疫器官发育，但对其免疫器官指数没有显著提高[21]，这与本试验结果相似。

3.2.2蝉花多糖对雁荡麻鸡免疫相关生化指标的影响 免疫球蛋白和补体在机体的体液免疫中起到重要作用，禽类血清中IgG作为机体抗感染的中坚力量，在体内维持时间长；而IgA通过聚集颗粒性抗原和中和病毒的能力从而抵抗微生物入侵机体的肠道、消化道等部位；补体则在机体内活化后扩大体液免疫反应。研究表明，中草药多糖起到增强机体体液免疫的作用[22-24]。方磊涵等[22]研究表明中草药复方多糖能提高试验鸡新城疫抗体效价及其血清中补体C3、C4水平。孙甜甜等[24]试验表明在肉仔鸡生长中添加枸杞粗多糖能有效提高其血清中IgG含量。本试验中，饲喂蝉花多糖(50 mg/kg)的试验鸡血清中IgA、C3水平高于空白对照组、免疫对照组、抗生素对照组。因此，在鸡的生长中添加50 mg/kg 蝉花多糖能显著提高血清中免疫球蛋白和补体含量，由此提高机体免疫力。说明真菌多糖中的活性物质作为免疫调节剂对机体免疫起到了促进作用[24]。

IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4在机体免疫应答中发挥重要功能，其含量能不同程度地反应机体当下免疫应答水平。IFN-γ可以调节T细胞和B细胞的免疫功能，促进巨噬细胞吞噬能力[25]。TNF-α具有众多免疫活性，参与单核巨噬细胞的活化、产生其他细胞因子和自身分泌的调节[26]。IL-2、IL-4具有激活和提高免疫细胞等多种功能，发挥着各自特殊的作用[27-28]。本试验中，饲喂蝉花多糖的试验鸡血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2含量都有不同程度的提高，而饲喂抗生素的试验鸡血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2含量显著低于饲喂蝉花多糖的试验鸡。由此推测蝉花多糖能激活机体体内巨噬细胞、T细胞和B细胞释放细胞因子发挥非特异性免疫作用,其中蝉花多糖中剂量组(50 mg/kg)对提高试验鸡血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4含量效果最佳，而在鸡的生长中添加抗生素会抑制体内巨噬细胞释放细胞因子间接致使机体免疫力低下。此结果与宋佳敏等[29]的研究中金蝉花多糖可以提高小鼠血清中干扰素、免疫球蛋白和白介素含量的结论相似。日本虫草子实体同样通过刺激小鼠体内的巨噬细胞释放IL-2、TNF-α从而对机体发挥免疫干预[30]。张伟云等[31]报道通过腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞和小鼠碳廓清试验，蛹虫草对机体内巨噬细胞吞噬能力表现显著提高。芦荟多糖和植物乳杆菌在鸡的生长中联合使用能使鸡血清中IFN-γ、IL-2、IL-4含量提高[32]。结合本试验蝉花多糖能提高鸡的免疫能力且效果显著，说明蝉花多糖可作为新的添加剂应用在鸡的养殖中来提高鸡的脂质代谢水平和免疫功能，这为开发绿色养殖模式提供了新的途径。

在鸡生长中添加蝉花多糖能提高雁荡麻鸡脂质代谢水平，并提高雁荡麻鸡免疫相关生化指标从而增强机体免疫应答水平。本试验条件下，蝉花多糖中剂量组(50 mg/kg)效果最佳。