长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因12在胃癌中的表达及其临床意义*

张圣洁，瞿利帅，曹 维

（南通大学附属医院消化内科，江苏 226001）

近年来胃癌检出率明显提高，但早期检出率仍较低。出现不适症状而就诊的患者多数已为肿瘤进展期，发生远处转移，预后较差，因此探索新的早期胃癌生物学诊断指标及治疗靶点尤为重要[1]。长链非编码RNA（long non-coding RNA，LncRNA），作为一组拥有大于200核苷酸单位却缺乏蛋白质编码能力的核苷酸序列，不仅广泛参与细胞增殖、分化，还通过影响细胞侵袭和转移能力来调节组织的异常发育，与癌症的发生、发展有着密切关系。小核仁RNA宿主基因12（SNHG12）为LncRNA的特殊类型，定位于染色体1p35.3。研究表明，LncRNA SNHG12与肝癌、胰腺癌、前列腺癌等多种癌症的进程关系密切[2]。LncRNA SNHG12在癌组织中高表达，表达量越高预示癌症增殖速度越快，侵袭能力越强。本研究选取2015—2020年南通大学附属医院手术切除的80对胃癌及癌旁组织，检测LncRNA SNHG12在胃癌及配对癌旁组织中的表达，研究LncRNA SNHG12与胃癌临床病理参数的相关性，探讨LncRNASNHG12对胃癌的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 手术切除并经病理证实的80对胃癌组织及其配对癌旁组织（切缘离癌组织边缘≥2 cm），术中组织切除后及时置于液氮中冷冻，并保存于-80℃冰箱。患者中男性42例，女性38例，年龄38～85岁，平均68±3岁。本研究经医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR） 按照说明书，使用Trizol试剂（Invitrogen公司，美国）提取组织中总RNA，然后采用反转录试剂盒（Fermentas公司）进行逆转录合成cDNA，采用MixPCR扩增试剂盒（Fermentas公司）在Light Cycler 96 PCR仪上进行qRT-PCR。PCR扩增体系为:SYBR Premix 12.5μL，Prime F和R（10μmol/L）各1μL，cDNA 2份，每份2μL，ddH2O 8.5μL。反应条件:预变性95℃30 sec，PCR反应95℃5 sec，60℃30 sec，共40个循环。PCR引物使用Primer 5.0软件设计，由上海Invitrogen公司合成。LncRNA SNHG12_F:5’-TCTGGTGATCGAGGACTTCC-3’；R:5’-ACCTCCTCAGTATCACACACT-3’；GAPDH_F:5’-GTCGATGGCTAGTCGTAGCATCGAT-3’；R:5’-TGCTAGCTGGCATGCCCGATCGATC-3’。以GAPDH为内参，采用2-ΔΔCt计算LncRNA SNHG12相对表达水平。

1.3 统计学处理 应用SPSS 25.0统计学软件进行数据分析处理，GrapghPad Prism8.0软件绘图。计量资料以±s表示，组间比较采用t检验；计数资料以频数和率表示，组间比较采用Fisher精确概率法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 LncRNA SNHG12在胃癌组织中高表达 qRTPCR结果显示，LncRNA SNHG12在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）。见图1。

图1 LncRNA SNHG12在胃癌及癌旁组织中的表达

2.2 LncRNA SNHG12表达与胃癌临床病理参数的关系 LncRNA SNHG12在胃癌组织中表达量与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及血管侵犯显著相关（P<0.05），但与患者性别、年龄及HP感染无明显相关性（P＞0.05）。见表1。

表1 LncRNA SNHG12表达与胃癌临床病理参数的关系 例

3 讨 论

LncRNA参与正常发育及疾病的多种细胞生物学过程，通过转录、翻译、蛋白质修饰、RNA-蛋白质或蛋白质-蛋白质复合物形成等多种形式介导基因表达。研究表明LncRNA表达水平高低直接反映肿瘤的性质，并与癌症患者的预后及生存时间密切相关。LncRNA还可通过竞争性占据miRNA的共享结合序列，隔离miRNAs并改变下游靶基因的表达，进而发挥内源性竞争性核糖核酸（competing endogenousRNAs，ceRNAs）作用[3]。例如，LncRNA HOTAIR通过调节miR-20a-5p/HMGA2轴影响乳腺癌细胞生长、迁移、侵袭和预后[4]，LncRNA MEG3通过调节p53信号通路抑制胃癌增殖和远处转移[1]，LncRNA AK023391通过激活PI3K/Akt信号通路而促进胃癌发生和侵袭[5]。研究LncRNA在胃癌发生、发展中的作用及其机制，有助于提高早期胃癌检出率，改善患者生存预后。

SNHG12是新发现的小核仁RNA宿主基因家族一员，在子宫内膜癌、肝癌、胰腺癌、三阴性乳腺癌等恶性肿瘤中异常表达[6-7]。2015年首次发现SNHG12在子宫内膜癌中高表达，降低LncRNA SNHG12表达则抑制子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭，过表达LncRNA SNHG12则促进内膜癌细胞增殖，抑制癌细胞凋亡[8]。肝癌组织SNHG12表达明显高于癌旁组织，SNHG12通过介导miR-199a-5p轴调节肝细胞癌的增殖、侵袭和上皮-间质转化过程[9]。SNHG12通过吸附miRNA-320b促进胰腺癌的进展[10]。三阴性乳腺癌中SNHG12表达显著上调，通过调节MMP13表达促进乳腺癌细胞的生长[11]。YANG等[12]研究发现，上调LncRNA SNHG12表达可明显减低miRNA-199a/b-5p轴的抑癌作用，进一步促进胃癌细胞的增殖和转移能力。ZHAO等[13]研究表明，LncRNA SNHG12还可通过吸附miR-16而促进胃癌细胞的生物学进程。ZHANG等[14]证实LncRNA SNHG12可作为小分子RNA-320的“分子海绵”竞争性结合miR-320，从而促进胃癌细胞的快速增殖。

本研究结果显示，LncRNA SNHG12在人胃癌组织中的表达显著高于配对癌旁组织，LncRNA SNHG12在胃癌组织中表达量与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及血管侵犯显著相关，提示LncRNA SNHG12确实可作为胃癌诊断和治疗的生物学指标。