VEGF、c-Met在结直肠腺癌中的表达及与临床病理特征的关系

田悦　苏群英　朱晓莹　黄云美　黄炳臣

【摘要】目的研究血管內皮生长因子（VEGF）、间质表皮转化因子（c-Met）蛋白在结直肠腺癌中的表达及其与患者临床病理特征的关系及表达的相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测195例人结直肠腺癌组织中VEGF和c-Met的蛋白表达，分析两者与临床病理特征的关系及两者表达的相关性。结果VEGF和c-Met在结直肠腺癌中的表达率分别为57.4%和64.6%;VEGF和c-Met蛋白表达在淋巴结转移阳性组较阴性组明显增强，差异有统计学意义（P<0.01），而与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、分化程度、浸润深度无关（P>0.05）;VEGF和c-Met两者蛋白表达有显著相关性（C=0.204，P<0.01）。结论结直肠腺癌中VEGF和c-Met的高表达在淋巴结转移中可能发挥了重要的作用。两者蛋白表达呈正相关，提示两者之间有协同作用，VEGF及c-Met可作为判断结直肠腺癌生物学行为的指标。

【关键词】结直肠腺癌;血管内皮生长因子;肝细胞生长因子受体;间质表皮转化因子;淋巴结转移

中图分类号：R735文献标志码：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.05.004

Expression of VEGF and c-Met in colorectal adenocarcinoma and their

correlation with clinicopathological characteristics of patients

TIAN Yue SU Qunying ZHU Xiaoying HUANG Yunmei HUANG Bingchen

（1.Department of Pathology， Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities，

2.Key Laboratory of Molecular Pathology 〔Hepatobiliary Diseases〕 of Guangxi， 3.Graduate School，

Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， Guangxi， China）

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） and c-Mesenchymal-epithelial transition factor （c-Met） protein in colorectal adenocarcinoma and their relationship with patient clinicopathological features and expression. Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expressions of VEGF and c-Met in 195 cases of colorectal adenocarcinoma， and the relationship between VEGF and c-Met and clinicopathological features and the correlation between their expressions were analyzed. ResultsThe positive expression rates of VEGF and c-Met in colorectal adenocarcinoma were 57.4% and 64.6%， respectively. Protein expressions of VEGF and c-Met in lymph node metastasis positive group were significantly higher than those in lymph node metastasis negative group， and difference was statistically significant（P<0.01）， while they were not correlated with gender， age， tumor location， tumor size， degree of differentiation and depth of invasion （P>0.05）. There was significant correlation between the protein expressions of VEGF and c-Met（C=0.204， P<0.01）. ConclusionHigh expressions of VEGF and c-Met in colorectal adenocarcinoma may play an important role in lymph node metastasis. Positive correlation of VEGF and c-Met protein expressions in colorectal adenocarcinoma suggests a synergistic effect between them， and VEGF and c-Met can be used as indicators to judge the biological behaviors of colorectal adenocarcinoma.124698E7-26CF-40DB-9D52-26B87174CA0F

【Key words】colorectal adenocarcinoma; VEGF; hepatocyte growth factor receptor; c-Met; lymph node metastasis

结直肠腺癌是发病率正在较快增长的常见癌症，老年患者逐年增多。多数患者诊断时就已经是中晚期，侵袭转移是患者治疗失败和死亡的主要因素。目前已知许多因子会促使肿瘤细胞运动、增强转移能力，包括肿瘤自分泌的肝细胞生长因子等可影响肿瘤细胞表面受体的分布，调节肿瘤细胞运动过程中细胞与细胞之间、细胞和基质之间的结合，并启动和维持肿瘤细胞的运动及定向迁移。我们采用免疫组织化学染色方法检测血管内皮生长因子（VEGF）和间质表皮转化因子（c-Met）在结直肠腺癌组织中的表达，探讨其与患者临床病理特征的关系及表达的相关性。

1 资料与方法

1.1 标本收集 收集右江民族医学院附属医院病理科2016年2月～2020年12月195例手术切除结直肠腺癌石蜡包埋癌组织。纳入标准：（1）结直肠腺癌的病理切片由两名副主任医师以上的病理医师确认;（2）具有患者完整的临床病理资料;（3）手术前未进行放疗、化疗或免疫治疗;（4）组织病理样本可用;（5）获得患者的知情同意，并获得相关伦理审批与同意。排除标准：（1）未经病理确诊患者;（2）临床病理资料欠缺;（3）手术前做过放疗、化疗或者免疫治疗的患者;（4）肿瘤细胞过少的样本;（5）不愿参加者或者未获得相关伦理委员会审批同意者。

1.2 临床资料的收集根据上述研究对象的纳入与排除标准，收集2016年2月～2020年12月右江民族医学院附属医院符合标准的结直肠癌病例195例。其中男性124例，女性71例;年龄24～85岁，平均年龄50.6岁，其中年龄≥50岁138例、<50岁57例;结肠部位106例、直肠部位89例;肿瘤直径≥5 cm 96例、<5 cm 99例;中高分化腺癌组156例、低分化腺癌和黏液腺癌为低分化组共39例;浸润深度T1+T2共80例、T3+T4共115例;有淋巴结转移89例、无淋巴结转移106例。

1.3 试剂和方法鼠抗人VEGF单克隆抗体、兔抗人c-Met单克隆抗体、SP即用型免疫组化试剂盒及DAB显色剂均购自北京中杉金桥公司。染色步骤按说明书进行，4 μm厚组织切片常规脱蜡、梯度乙醇入水。在EDTA抗原修复液中95℃～99℃抗原修复20 min，室温冷却10 min。除去切片组织外的水分，在离组织3 mm处用免疫组化油笔画圈，PBS缓冲液清洗2×3分钟，分别滴加VEGF和c-Met抗体并置于4℃冰箱过夜。第二天，应用SP检测和DAB显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，用已知阳性的肺腺癌组织作阳性对照。

1.4 结果判定VEGF染色阳性表达定位于细胞质，c-Met阳性表达定位于细胞膜和细胞质，以黄色、棕黄色、棕褐色为阳性着色，染色结果判定标准为综合阳性细胞比率及阳性强度进行半定量评分，染色强度：无着色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分;按显色细胞比例进行评分：0～10%为1分，11%～50%为2分，>50%为3分。两项相乘0～3分为阴性病例，4～9分为阳性病例。

1.5 统计学方法用SPSS 24.0软件包处理数据。VEGF和c-Met在结直肠腺癌中的表达与临床病理特征的差异用χ²检验，VEGF和c-Met在结直肠腺癌中表达的相关性用列联系数相关性分析。检验水准：α=0.05，双侧检验。

2 结果

2.1 VEGF和c-Met表達与结直肠腺癌临床病理特征的关系VEGF染色阳性表达定位于细胞质、c-Met阳性表达定位于细胞膜和细胞质，呈黄色、棕黄色、棕褐色。在195例结直肠腺癌中VEGF和c-Met的表达率分别为57.4%（112/195）和64.6%（126/195）。其中VEGF和c-Met表达与淋巴结转移有关（χ²=8.257，P<0.05;χ²=14.108，P<0.01），而与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、分化程度、浸润深度无关（P>0.05）。见表1。

2.2 VEGF和c-Met在结直肠腺癌中表达的相关性195例结直肠腺癌组织中VEGF和c-Met均为阳性表达82例、均为阴性39例，VEGF阳性而c-Met阴性30例、c-Met阳性而VEGF阴性44例，VEGF和c-Met的表达有相关性（C=0.204， P=0.004）。见表2。

3 讨论

侵袭转移是恶性肿瘤的重要生物学特征，其生长和转移有赖于肿瘤血管的形成。多数肿瘤细胞可合成分泌VEGF，并影响肿瘤生长、侵袭转移等病理过程。研究证实VEGF在前列腺癌、子宫内膜癌、肺腺癌等恶性肿瘤中高表达，且随着表达强度增高与肿瘤的进展和预后不良呈正相关[1～3]。臧志意等[4]通过检测肺腺癌组织中VEGF的表达研究发现，VEGF的表达强度与更大的肿瘤直径、淋巴结转移及更晚的TNM分期呈正相关。不同的研究也发现，在发生淋巴结转移、骨转移及转移灶数量多的乳腺癌、前列腺癌中VEGF表达强度明显高于无淋巴结转移和骨转移灶少的病例[5～6]。说明VEGF的高表达或过表达促进恶性肿瘤的侵袭转移，而肿瘤中新生小血管结构的不完整和高通透性以及血管网的增加是促进肿瘤增殖和转移的重要基础。我们的研究也发现VEGF在结直肠腺癌中的表达与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、组织分级分化、浸润深度及肿瘤直径等临床病理参数无关，而与淋巴结转移有关，在淋巴结转移组中VEGF蛋白表达率明显高于无淋巴结转移组，表明结直肠腺癌中VEGF表达上调参与肿瘤的淋巴结转移。张彬等人[7]采用免疫组化和酶联免疫法分别检测136例宫颈癌患者癌组织和血清中VEGF表达和Cox风险回归模型分析，结果表明VEGF表达上调是宫颈癌患者预后不良的独立危险因素。结直肠腺癌中VEGF蛋白表达可能是预测淋巴结转移和患者预后的较好指标。124698E7-26CF-40DB-9D52-26B87174CA0F

肿瘤细胞的运动和趋化性是恶性肿瘤转移的重要生物学基础，肿瘤细胞的迁移能力受肿瘤自身分泌的众多运动因子影响，其中肝细胞生长因子（HGF）也参与细胞迁移的调控。HGF/c-Met途径主要通过干扰其他基因的表达水平来影响肿瘤的微环境，王瑞等人[8]将c-Met基因质粒注射到小鼠肝脏后发现，c-Met可促进AKT/mTOR信号通路的激活而诱发肝癌。目前发现胃癌、口腔鳞状细胞癌、宫颈癌等[9～11]都可检出c-Met蛋白的表达，在乳腺癌、结直肠癌中也观察到c-Met的表达水平与淋巴结转移有关。其机制可能是c-Met与HGF特异结合导致磷脂肽肌醇-3激酶（P13K）磷酸化，诱导肿瘤细胞VEGF的分泌、表达和促进肿瘤血管的生成;HGF/c-Met可激活下游信号转导通路使β-连环蛋白的酪氨酸残基磷酸化，不能与E-钙黏蛋白结合形成功能复合体，降低细胞黏附。此外，HGF/c-Met途径尚可诱导基质金属蛋白酶（MMP）的分泌、促进细胞外基质降解等机制促进肿瘤细胞转移[12]。本组免疫组化结果分析显示，有淋巴结转移的结直肠腺癌组c-Met表达率为78.6%，明显高于无淋巴结转移组的52.8%，提示c-Met参与结直肠腺癌的淋巴结转移过程，高表达或过表达提示结直肠腺癌患者易于发生淋巴结转移并影响患者的预后。李雄峰等[13]分析c-Met在肺腺癌中的表达与临床病理特征关系发现，肺腺癌组织中c-Met高表达与淋巴结转移、病理分级、临床分期有关，高表达的c-Met提示患者预后不佳，是影响患者预后的独立因素。上述研究结果均提示c-Met有可能成为预测结直肠腺癌预后的一个重要生物学标志物。

在本实验中，我们对每例患者均用同一肿瘤蜡块组织连续切片进行VEGF和c-Met免疫组化染色，以降低肿瘤不同区域如不同分化程度等异质性对蛋白表达的影响。结果显示，VEGF和c-Met在结直肠腺癌中有较高的表达，在伴有淋巴结转移的结直肠腺癌病例中，VEGF和c-Met两者的表达率均较高，与非淋巴结转移组相比，差异有统计学意义，提示VEGF和c-Met在结直肠腺癌的侵袭转移过程中发挥重要作用，VEGF和c-Met高表达或过表达促进肿瘤的淋巴结转移。在本组免疫组化结果观察中VEGF、c-Met同时阳性和同时阴性的病例较多，相关分析显示，结直肠腺癌中VEGF和c-Met的表达具有显著相关性，提示两者在结直肠腺癌的淋巴结转移机制中存在协同作用，VEGF及c-Met可作为判断结直肠腺癌生物学行为的指标。参考文献[1] 李本根，梁天才，李晓光.miR-409-3p通过抑制LHX2调控VEGF/VEGFR2信号通路促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖[J].现代肿瘤医学，2021，29（21）：3731-3736.

[2] DZIOBEK K，OPAWSKI M，GRABAREK B O，et al.Changes in the expression profile of VEGF-A，VEGF-B，VEGFR-1，VEGFR-2 in different grades of endometrial cancer[J].Curr Pharm Biotechnol，2019，20（11）：955-963.

[3] USUDA K，IWAI S，FUNASAKI A，et al.Expression and prognostic impact of VEGF，CD31 and αSMA in resected primary lung cancers[J].Anticancer Res，2018，38（7）：4057-4063.

[4] 臧志意，魏小东.GOLPH3与VEGF在肺腺癌中的表达及其临床意义[J].中国临床新医学，2021，14（9）：915-920.

[5] 寧尚福，杨勇，凌振雄，等.血清VEGF、TLR4水平及CTCs在肺癌、乳腺癌和前列腺癌骨转移中的临床意义[J].海南医学，2021，32（19）：2469-2472.

[6] 王娟，黄炳臣，吴雪铭，等.ER、PR、Her-2、VEGF、p53和Ki67在乳腺癌中的表达及临床病理意义分析[J].右江医学，2019，47（3）：166-171.

[7] 张彬，王翠娟，王秀丽，等.血管内皮生长因子表达水平与宫颈癌患者预后的关系[J].中国妇幼保健，2021，36（2）：256-259.

[8] 王瑞，戴琪，胡俊杰.PTEN低表达和c-Met高表达激活AKT/mTOR信号通路促进肝细胞癌形成[J].细胞与分子免疫学杂志，2021，37（5）：448-454.

[9] 候涛涛，张剑锋，雷世睿，等.HGF、c-Met及p-Erk蛋白在胃癌组织中的表达及意义[J].现代肿瘤医学，2021，29（5）：819-823.

[10] 崔真真，柳志文.C-met与Cox-2在口腔白斑和口腔鳞状细胞癌组织中的表达研究[J].实用口腔医学杂志，2019，35（6）：839-842.

[11] 孙厚良，江秀娟，梅学英，等.MACC1基因和c-Met蛋白在宫颈癌中的表达及与淋巴结转移关系[J].基因组学与应用生物学，2018，37（6）：2720-2725.

[12] HORIGUCHI N，TAKAYAMA H，TOYODA M，et al.Hepatocyte growth factor promotes hepatocarcinogenesis through c-Met autocrine activation and enhanced angiogenesis in transgenic mice treated with diethylnitrosamine[J].Oncogene，2002，21（12）：1791-1799.

[13] 李雄峰，郗彦凤，史玉洁，等.肺腺癌中C-met和Cox-2的表达及预后意义[J].临床与实验病理学杂志，2020，36（7）：845-848.

（收稿日期：2021-11-18修回日期：2022-03-09）

（编辑：梁明佩）124698E7-26CF-40DB-9D52-26B87174CA0F