Beclin-1、ANGPTL4及miR-30e-5p在急性脑梗死中的表达及相关性

于贺花，赵方敏

(周口东新医院神经内科，河南 周口 466000)

急性脑梗死作为临床常见的脑部疾病，由脑缺血引起的脑部坏死，发病率极高[1-2]。临床研究[3-4]显示，在脑梗死发病过程中，大约40%的患者在72 h内出现神经功能严重缺损，或者患者虽然接受治疗，但病情仍呈现不断恶化趋势。自噬效应蛋白(Beclin-1)作为临床一种自噬调控基因，其能够有效地调控细胞的凋亡，参与脑组织再灌注损伤。Beclin-1属于酵母Apg6/Vps30基因的同源物，多数哺乳动物体内均有其存在，当机体出现氧化应激、神经毒素反应时，可激活机体发生自噬情况[5]。血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)作为近年来新发现的一种血管生成素样蛋白，其能够抑制脂蛋白脂肪酶及泡沫细胞的形成，进而稳定颈动脉粥样硬化斑块，抑制其发展[6]。微小RNA最为非编码的小分子RNA，其是潜在组织损伤的分子标记物[7]。有研究[8]显示，在急性脑梗死的发病过程中有多种miRNA参与。本研究中选取急性脑梗死患者，提取血清后对Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达进行分析，旨在研究三者在急性脑梗死中的表达及相关性。

1 对象与方法

1.2 方法

1.2.1 血清提取 提取所有受检者清晨空腹肘静脉血5 mL，置促凝管内，对其进行离心处理后提取上清液，放置于-80 ℃环境下保存待用。

1.2.2 检测方法 Beclin-1、ANGPTL4指标检测：使用酶联免疫吸附法检测血清Beclin-1、ANGPTL4水平，试剂盒购自美国RayBiotech 公司，检测时严格按照仪器说明书进行。

miR-30e-5p指标检测：使用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法对miR-30e-5p指标检测，采用microRNA提取分离试剂盒分离血清miR-15b细胞总RNA，采用TaqMan microRNA反转录试剂盒进行microRNA逆转录，采用SYBR Premix ExTaq II kit进行定量PCR反应，设置反应条件：预火95 ℃，预变性30 min，取出降温至90 ℃，变性5 s，迅速降温至58 ℃，退火20 s，温度保持60 ℃，延伸45 s，连续循环40次，重复实验3次。以U6为内参，采用2-△△Ct方法计算miR-30e-5p相对表达量。U6：上游引物：5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAT-3’；下游引物：5’-CGCTTCAGAATTTGCGTGTGAT-3’，miR-30e-5p：上游引物：5’-GGCGTGTAAACATCCTTGACTG’；下游引物：5’-GTGCAGGGTCCGAGCT-3’。

1.2.3 观察指标 对2组人群Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p水平进行检测，并且分析三者在不同进展及不同严重程度病情下的表达。分析三者在急性脑梗死中的相关性。

2 结果

2.1 2组Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达分析 对照组Beclin-1、ANGPTL4水平低于观察组，miR-30e-5p水平高于观察组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达分析

2.2 不同疾病进展下Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达分析 非进展性组Beclin-1、ANGPTL4水平低于进展性组，非进展性组miR-30e-5p表达高于进展性组，差异有统计学意义(P<0.005)。见表2。

表2 不同疾病进展下Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达分析

2.3 不同疾病程度下Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达分析 不同疾病程度下Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达存在差异性，与轻度组比较，中、重度组患者Beclin-1、ANGPTL4水平较高，miR-30e-5p表达较低；与中度组比较，轻度组Beclin-1、ANGPTL4水平较低，miR-30e-5p表达较高，重度组患者Beclin-1、ANGPTL4水平较高，miR-30e-5p表达较低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同疾病程度下Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达分析

2.4 Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达的相关性分析 采用Pearson相关性分析Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p三者在急性脑梗死中的相关性发现，Beclin-1、ANGPTL4呈正相关(r=6.617，P=0.011)；Beclin-1、miR-30e-5p呈负相关(r=-5.341，P=0.024)；ANGPTL4、miR-30e-5p呈负相关(r=-13.960，P=0.001)。见图1。

图1 Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p表达相关性分析

3 讨论

脑血管疾病作为全球疾病内负担最重的第3位疾病，据调查显示，我国每5例脑血管疾病患者中就会有1例死亡[10]。急性脑梗死作为临床常见的脑卒中类型，其临床发病机制较为复杂。有学者认为，急性脑梗死发生后会造成血管出现狭窄、闭塞，最终导致患者神经功能损害，严重者会出现意识障碍，威胁患者的生命安全[11]。

Beclin-1能够与死亡相关蛋白结合，进而诱导细胞凋亡[12-13]。当脑梗死发生后，机体主要通过抑制自噬，进而发挥对神经的保护作用，而Beclin-1在此过程中有着关键作用。有学者[14]在动物实验中指出，脑梗死大鼠梗死组织中的Beclin-1蛋白呈较高表达，提示当脑梗死发生后机体会出现神经细胞过度自噬的情况。本研究结果发现，急性脑梗死患者血清Beclin-1蛋白呈异常上升的趋势，且随着疾病的发展，Beclin-1蛋白水平呈不断上升的趋势。出现这种情况说明Beclin-1蛋白与急性脑梗死密切相关，脑梗死后，机体主要通过抑制自噬来发挥保护神经的作用，而Beclin-1蛋白则能够参与到自噬的过程中。

ANGPTL4作为血管生成素样蛋白家族中的第二个成员，其是在脂肪组织及肝脏中表达的循环蛋白[15-16]。ANGPTL4还是脂蛋白脂酶(LPL)的内源性抑制剂，其能够起到不可逆LPL的活性，进而减少机体的脂质吸收，起到较好地调节机体甘油三酯和胆固醇的分布。ANGPTL4作为一种分泌蛋白，其在临床能够起到调节血管通透性、血管生成的作用[17]。ANGPTL4在调节炎症信号传导、保持血管内皮细胞完整性、调节氧化应激之中起重要作用，因此急性脑梗死患者血清中ANGPTL4呈现异常表达。有研究[18]显示，ANGPTL4在动脉粥样硬化的发生发展及心脑血管疾病中均有重要作用。本研究结果发现，ANGPTL4在急性脑梗死中呈异常表达，随着疾病的发展，ANGPTL4蛋白水平呈现不断上升趋势。由此可见，ANGPTL4与急性脑梗死的发生发展密切相关。出现这种情况的原因可能是ANGPTL4通过抑制血管内皮生长因子下游Src激酶信号抵消血管的完整性损伤，进而维持动脉血管内皮细胞功能，抑制疾病的发生发展。

miRNA作为一种高度保守的小分子非编码RNA，其能够在转录水平中进行积极有效地调控，其不仅能够参与机体的正常生长、发育和代谢，并且其与疾病的发生发展密切相关。临床调查[19-20]显示，大脑内存在某种特异性的mRNA，其表达异常与神经系统密切相关。miR-30家族共有5个因子，miR-30的临床研究主要集中在癌症，有学者在研究中指出，miR-30e在心脏中高表达，在心脏疾病中呈现不断上升趋势[21]。本研究结果发现，miR-30e-5p在急性脑梗死呈异常表达，且随着疾病的发展，miR-30e-5p会随之下降，说明miR-30e-5p与急性脑梗死密切相关。且本研究中对Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p在急性脑梗死中均呈异常表达，且使用Pearson相关性对Beclin-1、ANGPTL4、miR-30e-5p进行分析发现，三者有一定的相关性，其中Beclin-1、ANGPTL4蛋白呈正相关；Beclin-1、miR-30e-5p与ANGPTL4、miR-30e-5p呈负相关。

综上所述，Beclin-1、ANGPTL4在急性脑梗死中呈异常上升趋势，miR-30e-5p呈异常下降趋势，且随着疾病的发展，Beclin-1、ANGPTL4上升程度越大，miR-30e-5p下降程度越大。