慢性牙周炎与强直性脊柱炎的相关性研究

赵 琳

(广元市中心医院风湿免疫科，四川 广元 628000)

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一种以骶髂关节为首发部位的慢性炎症性疾病，该疾病可以逐渐累及骶髂关节、脊柱、软骨组织及四肢关节，目前病因及机制未完全明确[1]。在AS疾病发生、发展及预后情况中，主要影响环节为免疫系统异常，有关文献报道[2]提出，T淋巴细胞亚群失衡、各种炎症因子产生增多及抑制炎症的因子减少均影响AS的发生与发展。已有的报道[3-5]关于影响AS的细胞因子包括肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)等。细胞因子白细胞介素-22(IL-22)是白细胞介素-10(IL-10)细胞因子家族的成员，由Th22细胞和自然杀伤细胞22(NK22)等细胞产生。有研究[6]显示，AS患者血清IL-22水平明显高于健康对照组，说明IL-22与AS疾病发展相关。慢性牙周炎普遍存在于发达国家及发展中国家，全世界范围内高达60%的成年人患有此病，其是一种对人类有广泛影响的慢性炎症疾病[7-8]。慢性牙周炎包括由细菌微生物的感染引起牙周围组织的病变和逐步出现的宿主自身炎症应答的损害[9-10]。在发病的过程中炎症反应导致软组织甚至骨组织的损伤及破坏[11]。根据GOLUB等[12]研究发现，不管是牙周细菌引起还是系统性免疫应答在慢性损伤性牙周炎病程中都有重要意义。从免疫学角度来讲，AS与慢性牙周炎的发生、发展都与自身免疫活动相关，同属于自身免疫性疾病，大规模的流行病学研究发现，AS人群里慢性牙周炎发病率高于普通人群，提示AS可能增加慢性牙周炎的风险[12-13]。同时慢性牙周炎的存在将增加系统性炎症因子的产生[14]。牙周致病菌和局部炎症反应产生的系统性炎症因子等可以直接进入外周血液循环，与AS等全身性疾病存在密切关系。本研究的目的是通过评估临床牙周参数和血清细胞因子水平，来了解AS与慢性牙周炎之间的可能性关系。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2019年1月—2020年12月广元市中心医院诊治的AS患者，所有患者纳入标准采用AS修订纽约标准[15]，均应用AS疾病活动度评分(ASDAS-CRP)评分计算出患者目前病情的活动评分。所有牙周炎患者纳入标准根据1999年牙周病国际研讨会制定的标准诊断，包括牙齿缺如情况、探测深度(PD)>3 mm及临床附着丧失(CAL)值。诊断标准：根据临床和影像学标准规定和描述在1999年的共识慢性牙周炎的分类，标准是:至少有四颗牙囊袋深度≥5 mm,与CAL水平同时≥2 mm[16]。排除标准:①牙周治疗的历史实验前的6个月期间。②<15齿。③糖尿病或妊娠、感染、肝炎、结核。所有参与者包括对吸烟者,曾经吸烟或从不吸烟者,根据提供的信息填写在一个标准的问卷。用以下临床牙周参数进行评估：牙齿数目存在；PD；CAL；牙龈菌斑块指数；探诊出血。PD是由威廉姆斯探针在6个地点周围每个牙，智齿除外：近中颊侧、中颊侧、远中颊侧、近中舌侧、中舌侧、远中舌侧[13]，进行了评估。随机选取10例AS患者为AS组；10例AS+慢性牙周炎患者为AS+CP组；10例慢性牙周炎患者为CP组；10例健康者为H组；所有患者均知情同意本次研究并签署同意书;本研究经院伦理委员会批准。4组受试者年龄、性别、吸烟情况、体质量指数(BMI)比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 4组受试者一般资料(n=10)

1.2 方法

1.2.1 血清及牙龈液中IL-22的测定 清晨空腹采集所有受试者的静脉血2 mL，4 ℃放置自然凝固后，3 000 r·min-1离心10 min，分离血清后置于-20 ℃冰箱冻存；牙龈液采集方法：有慢性牙周炎的患者从最深的牙周袋采集样本，无慢性牙周炎的受试者也在同一位点采集，收集用无菌纸带(# 30 periopaper)。在采样之前,牙龈液收集的位点收集前轻轻拭干唾液，隔绝唾液并用无菌棉花球祛除牙龈菌斑;然后,纸带在采集牙龈液的位点插入1 min。将4支30#吸潮试纸放于含有磷酸盐缓冲溶液(PBS)200 μL的无菌微型离心机管。所有牙龈液样本存储在-20 ℃冰箱等待进一步处理。应用双抗体夹心法ELISA同批检测血清及牙龈液中IL-22水平，试剂盒购置美国R&D公司，具体操作步骤严格按试剂盒说明书进行，在450 nm波长下测定OD值，以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制出标准曲线图并计算样本浓度。

1.2.2 AS+CP组、AS组患者临床及实验室指标 ASDAS-CRP评分[17]通过患者总体评价(疼痛视觉模拟评分VAS)、腰背痛、外周关节疼痛/肿胀以及晨僵持续时间评价，ASDAS-CRP=0.12×腰背痛+0.06×晨僵持续时间+0.10×患者总体评价+0.07外周关节肿胀/疼痛+0.58×Ln(CRP+1)，红细胞沉降率(ESR)标准检测方法：(魏氏法)采用枸橼酸钠(1∶4)抗凝的真空血沉管，采集受试者静脉血3 mL至采血管标注刻度，混匀5～8次后，2 h内使用SD-100动态血沉压积测试仪进行检测。ESR的检测限:0～160 mm·h-1。C-反应蛋白(CRP)检验方法：(乳胶凝集法)采用EDTA-K3抗凝的真空采血管，采集受试者静脉血3 mL ，混匀5～8次后，2 h内使用迈瑞CAL 8000血液细胞分析流水线进行检测。CRP的检测限:0.2～320.0 mg·L-1。实验室指标均在本院实验室检查结果。

2 结果

2.1 4组受试者血清及牙龈液IL-22表达水平比较 AS+CP组、AS组、CP组血清IL-22水平与H组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；AS+CP组、CP组、AS组牙龈液IL-22水平与H组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。由AS+CP组与其他3组分别比较，AS+CP组血清及牙龈液中IL-22水平最高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 4组受试者血清及牙龈液IL-22表达水平比较

2.2 AS+CP组、AS组2组CRP、ESR、ASDAS-CRP评分的关系 AS+CP组CRP值高于AS组，差异无统计学意义(P>0.05)；AS+CP组ESR值高于AS组，差异有统计学意义(P<0.05)。其中，AS+CP组疾病活动指数ASDAS-CRP高于AS组，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 AS+CP组、AS组CRP、ESR、ASDAS-CRP评分的关系

3 讨论

IL-22是IL-10细胞因子家族的成员，由Th22细胞和NK22等细胞产生。系统性炎症状态对于慢性牙周炎有影响，并且有导致疾病活动的这一假说。但是关于这一假说缺少相关的慢性牙周炎数据[18]。本研究通过评估临床参数和测定促炎细胞因子来了解AS与慢性牙周炎之间影响。本研究结果显示，AS+CP组不管是血清还是牙龈液IL-22水平均高于其他组，同时也有研究[6]证实，AS患者血清中IL-22明显增高于健康组。慢性牙周炎在高水平表达的IL-22情况下，可能导致牙周损坏数量增加和持续恶化时间加长,这或许可以解释AS患者IL-22水平与附着丧失情况的关系。PISCHON等[19]研究也表明，实验组囊袋深度和附着丧失情况明显不同于健康对照组。因为牙周的情况一般受到多系统的影响,从而出现了AS疾病活动度可影响慢性牙周炎进展的假说[20-21]。通常用ASDAS-CRP,ESR和CRP来评估AS的疾病活动度[22]。本研究结果显示，AS+CP组的ESR、CRP及ASDAS-CRP评估高于AS组，CRP及ASDAS-CRP评估差异无统计学意义，但ESR差异有统计学意义，表明慢性牙周炎有促进炎症因子产生同时加重AS炎症反应的可能，OGRENDIK[23]通过回顾性分析多篇牙周疾病与AS关系的文章，发现牙周疾病对于AS病情有一定影响。因此对于AS的患者来说慢性牙周炎的治疗成为必要事件。有研究[24-26]表明，TNF-α拮抗剂和非甾体抗炎药在治疗AS时同时患有慢性牙周炎的患者牙周炎症也有一定改善。但也有研究相反，SEZER等[27]研究结果表明,患者的疾病活动与牙周破坏(由囊袋深度和附着丧失情况)之间没有显著影响。结果相反可能是混杂因素的关系，比如吸烟条件被认为是引起或促进慢性牙周炎进展和引起血清细胞因子水平升高的参与因素。即使年龄、性别差异和潜在的混杂因素消除,BMI值显著提高组也可能影响血清细胞因子水平和牙周状态[28]，从而导致实验结果不同。由此可见AS与牙周炎症疾病是存在一定的潜在联系，但需要更多地研究来证实。

综上所述，本研究可以得出结论是不同组之间牙周参数存在差异，患者的牙周状况可能影响IL-22水平，慢性牙周炎对于AS疾病病情可能有促进作用，AS对于牙周状况也有一定影响。本研究存在不足之处，不能完全排除炎症相关叠加导致相关改变，纳入本研究的样本筛选可能有不足，纳入样本量不十分充足，可能导致结论的局限性和偏倚。在今后的临床实践过程中，将继续纳入、整理和分析相关的资料，并对其研究归纳总结。