通肾颗粒对靶动物鸡的安全性试验

祁会彩，辛怡霖，代德华，侯佳琪，唐 熙，李青云，张 欣，潘康锁，李引乾*

(1.西安市农业综合执法支队未央大队，陕西西安 710016；2.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨陵 712100；3.陕西省动物卫生与屠宰管理站，陕西西安 710016；4.陕西省农业检验检测中心，陕西西安 710016)

慢性肾炎在临床上以尿量少、蛋白尿[1]、血尿、水肿[2]等为特征，该病发病缓慢，病程较长，后期会造成肾功能异常，且不易诊断[3]，给畜牧养殖业带来了很大的困扰。中医认为，慢性肾炎属于本虚标实[4]，气虚血淤，通常以补气益血，健脾利尿，清热凉血为治则[5]。由黄芪、苦参、白茅根、金银花等多种中药组成的通肾颗粒，具有益气固表、清热凉血、清热利尿、增强免疫等功效，用于改善慢性肾炎的症状[6]。参照农业部《兽用中药、天然药物临床试验技术指导原则》[7]和《中华人民共和国农业部公告第442号·2004年12月》[8]，以通肾颗粒临床推荐剂量的 1、3、5 倍给鸡连续混饮给药5 d，并分别于给药前、给药第3天、第5天以及停药后第7天观察受试鸡的一般临床症状、血常规、血液生化及病理组织学等指标的变化，以评价通肾颗粒应用于靶动物鸡的安全性和安全剂量，为其临床安全用药提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物与药品 11日龄健康三黄肉鸡80只，由西北农林科技大学实验动物中心提供，试验期间常规饲养。通肾颗粒(批号：20181011)，河南惠通天下生物有限公司产品。

1.1.2 主要试剂 二甲苯(批号：20171210)，广东省化学试剂工程技术研究工发有限公司产品；无水乙醇(批号：20171028)，广东光华化学厂有限公司产品；甲醛、丙酮(批号：20171125和20171125)，天津博迪化工股份有限公司产品；石蜡(批号：20171022)，抚顺东科蜡业有限公司产品；苏木精、伊红(批号：20170825和20171115)，上海化学试剂站分装厂产品；真空血样采集容器，江苏康捷医疗器械有限公司产品。

1.1.3 主要仪器 干式生化分析仪，日本富士胶片株式会社产品；全自动血细胞分析仪，日本东亚公司产品；台式低速离心机，湖南赫西仪器装备有限公司产品；精密旋转切片机，美国AO公司产品；生物显微镜，重庆麦克光电仪器有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 试验动物的分组与处理 将雏鸡饲养至10日龄，从中选取80只精神状态良好的鸡，分为4组，每组20只，包括空白对照组和通肾颗粒1、3、5倍推荐剂量组。空白对照组正常饲养，不给药；试验组按照通肾颗粒1、3、5 倍的推荐剂量进行混饮给药，即3.0、9.0、15.0 g/kg。自11日龄开始给药，每天1次，连用5 d。

1.2.2 考察指标

1.2.2.1 一般临床症状观察 试验期间每天观察受试动物的精神及羽毛状态、行为、采食与饮水情况是否正常[9]。给药前后逐只称重，并记录各只的呼吸次数。

1.2.2.2 血常规与血液生化指标的测定 分别于给药前、给药第3天、第5天以及停药后第7天采集翅下静脉血，每次采血1 mL,加肝素钠抗凝，以血细胞分析仪检测鸡只红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、淋巴细胞(LY)比例、平均血红蛋白浓度(MCHC)。另外采集1 mL翅下静脉血，不加抗凝剂，离心后分离出血清,以生化分析仪检测肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及三酰甘油(TG)。

1.2.2.3 剖检及病理组织学观察 试验结束后，将各组鸡称重后进行剖检，分离出脾、肝、肾，剪成适当大小后浸入100 mL/L中性福尔马林中，常规方法制备病理切片，HE染色后镜检。

2 结果

2.1 一般临床症状

与空白对照组相比较，在整个试验期间，各给药组受试鸡均精神状态良好，羽毛鲜亮，行为及采食饮水正常，未出现与药物相关的临床异常现象，试验前后各组鸡的呼吸次数与体重见表1。试验组和对照组鸡呼吸次数和体重在试验前后均未出现明显变化，差异不显著(P>0.05)。

2.2 血常规测定结果

对靶动物鸡连续混饮5 d通肾颗粒，测定其血常规参数，包括红细胞、白细胞、血红蛋白、淋巴细胞比例以及平均血红蛋白浓度(表2)。试验组的各项数据与空白对照组相比，同一时间同一指标差异不显著(P>0.05)。

表1呼吸次数与体重测定结果

表2血常规测定结果

2.3 血液生化指标测定结果

对靶动物鸡连续混饮5 d通肾颗粒，测定其生化指标，包括肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及三酰甘油(TG)(表3)。同一时间比较，对照组与试验组差异不显著(P>0.05)，随着试验时间的推移，各指标无明显变化。

2.4 剖检及病理切片观察

试验结束后，随机挑选1、3、5倍剂量组和空白对照组各5只鸡进行剖检，肉眼观察受试动物的心脏、肝脏、脾脏、肺脏以及肾脏等器官，均未发现明显病变。取5倍剂量组和对照组的脾脏、肝脏和肾脏进行病理组织学观察(图1)。5倍剂量组与空白对照组相比，脾脏结构清晰，无病变组织,肝细胞无肿大坏死等异常情况；肾脏结构和肾小球形态正常，说明连续5 d混饮5倍推荐剂量的通肾颗粒对鸡的主要脏器不会产生毒性作用及病理性损伤。

表3血液生化指标测定结果

3 讨论

临床上多用化学药物治疗慢性肾炎，但久用易造成不良反应，甚至蓄积毒性，有研究表明中药复方制剂及中药中的有效成分对于慢性肾炎的治疗有着良好的效果[10-11]。因此，采用中药治疗慢性肾炎具有重要的意义。本试验以1、3、5倍的临床推荐剂量给鸡混饮给药，从受试鸡的一般生活状况、血常规指标、生化指标和病理组织学变化等方面对其进行了安全性评价和评估。结果显示通过连续混饮通肾颗粒5 d，所有受试动物均精神状态良好，无死亡或者中毒等现象，试验的各项指标正常，剖检及病理组织学观察未见异常变化，说明本试验中各剂量的通肾颗粒未引起鸡产生与药物相关的不良反应，生长状况良好，对脾脏、肝脏、肾脏无损伤。

A、C、E.5倍剂量组脾脏，肝脏，肾脏；B、D、F.空白对照组脾脏，肝脏，肾脏A,C,E.Spleen,liver and kidney in 5-fold dose group; B,D,F.Spleen,liver and kidney in control group

血常规及血液生化数据可以作为判断机体是否健康的指标，血清中的 ALT、AST能反映肝脏状态，BUN、CRE 可以反映出肾脏代谢是否正常，TG的含量可以反映机体脂类的吸收代谢情况[12-13]。本试验中，各剂量试验组与对照组相比，血常规及血液生化指标在试验前后没有明显变化，说明1、3、5倍剂量的通肾颗粒不会影响机体的内脏健康以及正常功能和代谢。