浸润性乳腺癌不同分子亚型p53与EGFR的表达及相关性分析

王新昭, 孙菊杰, 刘 琪, 左文述, 郑美珠, 马素刚, 于志勇

论 著

浸润性乳腺癌不同分子亚型p53与EGFR的表达及相关性分析

王新昭, 孙菊杰, 刘 琪, 左文述, 郑美珠, 马素刚, 于志勇

目的 分析浸润性乳腺癌不同分子亚型中p53与表皮生长因子受体(EGFR)的表达情况及其相关性。方法 回顾性分析山东省肿瘤医院2012年1月至2013年8月264例可手术乳腺癌患者的临床及病理资料，分析分子亚型与临床病理特征的相关性及不同分子亚型中p53与EGFR表达的相关性。结果 乳腺癌分子亚型与发病年龄、初潮年龄无统计学差异(均P>0.05)。分子亚型与是否绝经、肿瘤直径、淋巴结转移、病理分期、细胞角蛋白5/6(CK5/6)、p53及EGFR表达状况具有统计学差异(均P<0.05)。Luminal型乳腺癌患者T1期所占比例多于non-Luminal型乳腺癌患者(P<0.05)。p53与EGFR总体表达呈正相关(r=0.226，P<0.05)，进一步分层分析显示各分子亚型中只有三阴性乳腺癌(TNBC)中p53与EGFR表达呈正相关(r=0.319，P<0.05)，其他亚型中p53与EGFR表达无相关性(均P>0.05)。结论 p53与EGFR在TNBC中表达呈正相关，探讨二者的表达有助于进一步了解TNBC的分子生物学特征，并为TNBC的治疗提供新的思路。

乳腺肿瘤； 分子亚型； 免疫组织化学； p53； EGFR

乳腺癌是一种异质性疾病，不同的分子亚型具有不同的分子生物学特点及预后。其中三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)具有侵袭性强、病情发展快、易转移复发及预后较差等临床特点[1]，目前化疗是唯一有效的治疗手段，靶向治疗TNBC尚不成熟。既往研究发现TNBC中p53及EGFR表达水平较高[2-3]。本研究旨在探讨p53与EGFR在乳腺癌各分子亚型中的表达情况以及二者的相关性，以期为TNBC靶向治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012年1月至2013年8月在山东省肿瘤医院外科二病区行手术治疗的初治浸润性乳腺癌共435例。排除接受新辅助治疗,术前已在外院切检分期不详的病例后共有264例。免疫组织化学检测指标包括雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER-2)、Ki-67、CK5/6、p53及EGFR。患者年龄25～78岁，平均年龄(48.3±10.8)岁，中位年龄49岁。根据2010年第7版美国癌症联合委员会(AJCC)癌症分期标准对入组病例进行分期。

1.2 免疫组织化学检测结果判读标准 运用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP)操作，DAB进行染色。所有病理及免疫组化切片均由2名经验丰富的病理医师阅片，ER、PR、p53及Ki-67染色主要位于细胞核内，HER-2、CK5/6及EGFR染色主要位于细胞膜或细胞质(见图1)。免疫组织化学结果判断以染色细胞占所有细胞的比例进行计数。ER及PR表达≥1%为阳性[4]；Ki-67表达≥20%为高表达[5],根据美国临床肿瘤学协会(ASCO)/美国病理医师学院(CAP)推荐标准将HER-2分为HER-2阳性(评分3+)，HER-2可疑阳性(评分2+)以及HER-2阴性(评分0或1+)，对于可疑阳性的病例均行原位荧光杂交(FISH)予以确认。当染色细胞≥10%时，p53、EGFR、CK5/6判为阳性。

图1 浸润性乳腺癌免疫组化指标表达 ×200

1.3 分子亚型定义 根据2013年St Gallen国际乳腺癌会议专家共识[5]将乳腺癌分为管腔型(Luminal)和非管腔型(non-Luminal)(见表1)。

1.4 统计方法 采用SPSS 17．0软件进行统计学处理。运用χ2检验比较不同分子亚型乳腺癌临床及病理特征的统计学差异，运用Spearman相关分析比较p53与EGFR在不同分子亚型中表达的相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

表1 浸润性乳腺癌分子亚型分型标准

2 结果

2.1 不同分子亚型乳腺癌临床病理特征(表2) 由表2可见，Luminal B型乳腺癌最多见(37.5%)，其次依次为TNBC(26.1%)，Luminal A型(23.9%)，HER-2过表达型(12.5%)。乳腺癌分子亚型与发病年龄、初潮年龄无统计学意义(均P>0.05)，与是否绝经、肿瘤直径、淋巴结转移、病期及CK5/6表达状况有统计学意义(均P<0.05)。Luminal型乳腺癌患者T1期所占比例较non-Luminal型乳腺癌患者为多(P<0.05)。

表2 不同分子亚型乳腺癌临床病理特征(例)

注：*Luminal型与non-Luminal型乳腺癌肿瘤直径比较(χ2=8.620，P=0.003)。

2.2 不同分子亚型中p53与EGFR表达分析结果 分子亚型与p53及EGFR表达状况有统计学差异(均P<0.05，表2)。浸润性乳腺癌p53与EGFR表达呈正相关(r=0.226，P<0.05，表3)。分层分析显示各分子亚型中只有TNBC中p53与EGFR表达呈正相关(r=0.319，P<0.05)，其他各分子亚型中p53与EGFR表达无相关性(均P>0.05)，见表4。

表3 浸润性乳腺癌中p53与EGFR表达的相关性

表4 不同分子亚型乳腺癌p53与EGFR表达的相关性

3 讨论

随着分子生物学技术的发展，医学也进入分子水平时代，自2000年Perou等[7]将乳腺癌分为不同的分子亚型以来，乳腺癌的治疗逐渐进入到个体化治疗阶段,根据不同分子亚型选择最佳治疗方式，可使不同分子亚型乳腺癌患者最大程度获益[8]。本研究依据2013年st gallen 共识将乳腺癌分为4种分子亚型，结果显示Luminal B型乳腺癌最多见(37.5%)，其次依次为TNBC(26.1%)，Luminal A型(23.9%)，HER-2过表达型(12.5%)。Howland等[9]报道称乳腺癌分子亚型中Luminal B型为50.4%，TNBC为17.3%，Luminal A型为25.3%，HER2过表达型为6.9%。Howland的研究显示Luminal B型发病率高于本研究结果，其他各亚型发病率低于本研究结果，分析原因可能来自于人种和免疫组化检测技术的差异；另外，还可能与本研究分子亚型分型标准不同有关。基底细胞样乳腺癌(basal-like breast cancer,BLBC)与TNBC约有80%的重合，本研究CK5/6在TNBC中表达率为52.2%。CK5/6是一种基底型角蛋白，表达于上皮组织的基底层中，因此，CK5/6阳性的TNBC可能为BLBC，其在TNBC中比较具有代表性，可将CK5/6表达作为BLBC的标志物。本研究发现HER-2过表达型乳腺癌与TNBC肿瘤直径较大，这与Park等[10]的报道一致，这可能与HER-2过表达型乳腺癌和TNBC侵袭性强，肿瘤生长较快有关。本研究结果显示Luminal B(HER-2阴性)型乳腺癌淋巴结转移率较高，TNBC淋巴结转移率较低(33.3%)，Bennis等[11]的研究也显示Luminal B型乳腺癌淋巴结转移率为74%，TNBC淋巴结转移率55.2%，由此我们推测LuminalB型乳腺癌的转移途径可能更倾向于淋巴途径，而TNBC可能更易发生血行转移。

p53基因对细胞分裂与增殖起负调控作用，当p53基因发生突变时不仅无法引起细胞增殖的停滞和凋亡，反而能导致细胞生长失控以及肿瘤的形成。野生型p53基因半衰期较短，免疫组化检测结果为突变型p53。Curtis等[12]研究发现，Luminal A型乳腺癌p53突变率为5%，Luminal B型为13%，TNBC为34%，HER2过表达型为22%。本研究结果显示Luminal A型、Luminal B型、TNBC及HER-2过表达型乳腺癌p53突变率分别为9.5%、37.4%、43.5%及45.5%。本研究不同分子亚型p53突变率均高于Curtis等[12]的研究，分析其原因可能与研究对象种族、样本量、检测技术等有关。乳腺癌中EGFR过度表达与肿瘤体积大、分化差以及预后不良有关，各种分子亚型乳腺癌均可见EGFR过度表达，但是TNBC中EGFR过度表达率高于其他分子亚型[13]。本研究TNBC中EGFR的表达率为42%，稍低于Dent等[14]的报道。

p53基因突变可导致p63基因功能缺失，进而引起EGFR基因扩增，最终推动了TNBC的形成[15]。本研究结果显示p53与EGFR总体表达呈正相关，进一步分层分析发现只有TNBC中p53与EGFR表达呈正相关，其他分子亚型p53与EGFR表达无显著相关性。虽然EGFR在乳腺癌中表达水平较高，但是目前针对EGFR靶向治疗乳腺癌的效果却不理想，可能存在其他信号蛋白影响EGFR通路。Huang等[16]研究发现EGFR抑制剂对表达野生型p53以及EGFR突变的肺癌细胞具有杀伤作用而对p53及EGFR均突变的肺癌细胞耐受，这提示我们野生型p53基因可能具有调控EGFR抑制剂效应的作用。p53基因突变可能与TNBC对EGFR抑制剂耐药有关，而突变p53在TNBC中表达水平较高,提示我们有必要通过靶向调控p53表达对EGFR相应的信号传导通路展开新的认识。重建野生型p53基因可能克服TNBC患者对EGFR抑制剂耐药，p53基因治疗联合靶向抑制EGFR可能改变部分TNBC患者的治疗模式。

本研究未发现乳腺癌分子亚型与发病年龄相关，Luminal B(HER-2阳性)型乳腺癌未绝经的患者多见，其他分子亚型与是否绝经没有相关性(P>0.05)。这与美国学者报道的TNBC多见于40岁以下及未绝经患者是有差别的[17-18],可能是由于种族差异或者是本研究病例来自于单中心。

综上所述，p53与EGFR在TNBC中表达率较高而且二者呈显著正相关，其他各型p53与EGFR表达无相关性。重建野生型p53基因治疗靶向联合抑制EGFR可能给TNBC患者带来新的治疗机会。

[1] 李春艳, 王培, 张晟, 等. 三阴性乳腺癌的临床病理特征和预后分析[J]. 中华肿瘤杂志, 2013, 35(3): 463-467.

[2] Grob TJ, Heilenkötter U, Geist S, et al. Rare oncogenic mutations of predictive markers for targeted therapy in triple-negative breast cancer[J]. Breast cancer Res Treat, 2012, 134(2): 561-567

[3] Dent R, Trudeau M, Pritchard KI, et al. Triple-negative breast cancer: clinical features and patterns of recurrence [J]. Clin Cancer Res, 2007, 13(15): 4429-4434.

[4] Hammond MEH, Hayes DF, Dowsett M, et al. American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for immunohistochemical testing of estrogen and progesterone receptors in breast cancer (unabridged version)[J]. Arch Pathol Lab Med, 2010, 134(7): e48-e72.

[5] Goldhirsch A, Winer EP, Coates AS, et al. Personalizing the treatment of women with early breast cancer: highlights of the St Gallen International Expert Consensus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2013[J]. Ann Oncol, 2013, 24(9): 2206-2223.

[6] Prat A, Cheang MC, Martin M，et al. Prognostic significance of progesterone receptor-positive tumor cells within immunohistochemically defined luminal A breast cancer[J]. J Clin Oncol，2013，31(2): 203-209.

[7] Perou CM，Sorlie T，Eisen MB，et al．Molecular portraits of human breast tumour’s[J]．Nature，2000，406(6797)：747-752.

[8] 童钟，李鸿君，朱立新. 不同分子亚型可手术乳腺癌患者个体化综合治疗的临床观察[J].中国普通外科杂志，2012,21(11), 1353-1356.

[9] Howland NK, Driver TD, Sedark MP, et al. Lymph node involvement in immunohistochemistry-based molecular classifications of breast cancer[J]. J Surg Res，2013，185(2):697-703.

[10] Park S, Koo JS, Kim MS, et al. Characteristics and outcomes according to molecular subtypes of breast cancer as classified by a panel of four biomarkers using immunohistochemistry[J].Breast, 2012, 21(1): 50-57.

[11] Bennis S, Abbass F, Akasbi Y, et al. Prevalence of molecular subtypes and prognosis of invasive breast cancer in north-east of Morocco: retrospective study[J]. BMC Res Notes, 2012, 5(1): 436.

[12] Curtis C, Shah S P, Chin SF, et al. The genomic and transcriptomic architecture of 2,000 breast tumours reveals novel subgroups[J]. Nature, 2012, 486(7403): 346-352.

[13] Masuda H, Zhang D, Bartholomeusz C, et al. Role of epidermal growth factor receptor in breast cancer[J]. Breast Cancer Res Treat, 2012, 136(2): 331-345.

[14] Dent R, Trudeau M, Pritchard KI, et al. Triple-negative breast cancer: clinical features and patterns of recurrence[J]. Clin Cancer Res, 2007, 13(15): 4429-4434.

[15] Shapira I, Lee A, Vora R, et al. P53 mutations in triple negative breast cancer upregulate endosomal recycling of epidermal growth factor receptor (EGFR) increasing its oncogenic potency[J]. Crit Rev Oncol Hematol, 2013, 88(2):284-292.

[16] Huang S, Benavente S, Armstrong EA, et al. p53 modulates acquired resistance to EGFR inhibitors and radiation[J]. Cancer Res, 2011, 71(22): 7071-7079.

[17] Bauer KR, Brown M, Cress RD, et al. Descriptive analysis of estrogen receptor (ER)-negative, progesterone receptor (PR)-negative, and HER-2-negative invasive breast cancer, the so-called triple-negative phenotype[J]. Cancer, 2007, 109(9): 1721-1728.

[18] O’Brien KM, Cole SR, Tse CK, et al. Intrinsic breast tumor subtypes, race, and longterm survival in the Carolina Breast Cancer Study[J]. Clinical Cancer Research, 2010, 16(24): 6100-6110.

Correlation analysis between p53 and EGFR expression in distinct molecular subtypes of invasive breast cancer

WANGXinzhao1,SUNJujie2，LIUQi3,ZUOWenshu1,ZHENGMeizhu1，MASugang4,YUZhiyong1.

(1.DepartmentofBreastSurgery,ShandongCancerHospital,Jinan250117,China; 2.DepartmentofPathology,ShandongCancerHospital; 3.DepartmentofThyroidGlandandBreastSurgery,WeifangTraditionalChinese

Hospital,Weifang261041,China;4.DepartmentofGeneralSurgery,ShandonySixthPeople’sHospitalofJinan,Jinan250200,China)

YUZhiyong,E-mail：drzhiyongyu@aliyun.com

Objective To investigate the correlation between p53 and EGFR overexpression in distinct molecular subtypes of invasive breast cancer.Methods The clinicopathology data of 264 operable breast cancer patients from January 2012 to August 2013 were retrospectively analyzed, and the correlation of p53 and epidermal growth factor receptor (EGFR) expression in distinct molecular subtypes was investigated.Results No statistically significant differences were found among distinct molecular subtypes regarding age at diagnosis and age at menarche by using chi-square test(allP>0.05). Statistically significant differences were found among distinct molecular subtypes regarding menopause status, tumor size, lymph node status, pathological stage , Cytokeratin 5/6 (CK5/6), p53 and EGFR (allP<0.05).There were more patients with T1 stage in Luminal subtype than that of in non-luminal subtype (P<0.05).p53 expression had a positive correlation with EGFR expression in invasive breast cancer (r=0.226,P<0.05). There was a significant positive correction between p53 and EGFR in triple-negative breast cancer (TNBC) by stratification analysis (r=0.319,P<0.05), not in other subtypes(allP>0.05).Conclusions There was a positive correlation between p53 and EGFR in TNBC.P53 and EGFR in TNBC may help us to comprehensively recognize the molecular biological characteristics of TNBC，and may offer us a new idea to TNBC treatment.

breast cancer; molecular subtype; immunohistochemistry; p53; EGFR

山东省自然科学基金(ZR2012HL34)

250117 山东 济南， 山东省肿瘤医院 乳腺外科(王新昭，左文述，郑美珠，于志勇)，病理科(孙菊杰)； 261041 山东 潍坊，潍坊市中医医院 乳腺甲状腺外科(刘 琪)；250200 山东 济南，济南市第六人民 医院 普外科(马素刚)

王新昭，男，硕士研究生，研究方向：乳腺肿瘤的基础及临床，E-mail：08wangxinzhao@163.com

于志勇，男，主任医师，擅长乳腺肿瘤外科治疗及基础研究，E-mail：drzhiyongyu@aliyun.com

10.3969/j.issn.1674-4136.2015.02.003

1674-4136(2015)02-0078-05

2014-12-01][本文编辑：文 心]