钙磷脂结合蛋白Ⅱ在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

高夕英， 张英豪， 张荣杰

论 著

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

高夕英， 张英豪， 张荣杰

目的 研究钙磷脂结合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)在食管鳞癌及癌旁组织中的表达，分析其与食管鳞癌临床病理特征间的关系。方法 应用免疫组化法检测AnnexinⅡ在41例食管鳞癌组织及配对的癌旁组织、10例正常胃组织中的表达。 结果 AnnexinⅡ蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织及正常组织，差异具有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌组织中Annexin Ⅱ的表达水平与肿瘤分化程度及淋巴结是否转移相关(P<0.05)，而与年龄、性别、浸润深度、临床分期无关(均P>0.05)。结论AnnexinⅡ的表达在食管鳞癌的发生、发展过程中起重要作用，有望作为食管鳞癌诊治的新靶点。

钙磷脂结合蛋白Ⅱ； 食管鳞癌； 淋巴结转移； 肿瘤分化

食管癌在我国是较常见的消化道恶性肿瘤之一，近年来其发病率逐年提高[1]。以手术为主的综合治疗虽改善了食管鳞癌患者的生活质量和远期生存，但往往治疗后仍会发生复发或转移，预后较差，总5年生存率不到30%[2]。钙磷脂结合蛋白Ⅱ(Annexin Ⅱ)是Annexins超家族中A亚家族的重要成员，具有钙离子介导的磷脂结合特性，其在人体内皮细胞、单核/巨噬细胞、骨髓细胞和某些肿瘤细胞中表达丰富，在人体细胞中的作用主要是参与细胞膜的形成、细胞的转运活动、吞吐、增殖、信号转导、分化以及凋亡等重要的生命过程[3]。近年来的报道AnnexinⅡ的表达失调与诸多肿瘤的侵袭、转移等机制的形成中扮演重要角色[4]。但关于AnnexinⅡ在食管鳞癌中的表达及临床意义的报道较少，本研究拟通过测定AnnexinⅡ在食管鳞癌中的表达探讨其能否成为食管鳞癌诊断治疗指标的可能性。

1 材料和方法

1.1 标本来源 收集荣成市人民医院2009年4月至2011年7月手术后经病理证实41例食管鳞癌手术切除标本，在41例标本中，均含有配对的癌旁组织(距癌组织≥5 cm)。所有标本均有完整临床资料、病理分化程度和随访资料，且术前均未行放化疗等治疗。其中男23例，女18例，男女之比1.28∶1，年龄42～81岁，中位年龄56.5岁；中低分化14例，高分化27例。有淋巴结转移19例，无淋巴结转移22例。肿瘤浸润深度：浅肌层17例，深肌层15例，纤维膜9例。TNM分期Ⅰ期11例，Ⅱ期12例，Ⅲ期16例，Ⅳ期2例。同时另选取10例食管良性病例的正常食管组织切片作为正常对照，所有标本均置于液氮中冻存备用。

1.2 主要试剂 AnnexinⅡ抗体 鼠抗人单克隆抗体(浓度为1∶300)购自美国Abcam公司，EliVisionTM试剂盒、免疫组化二抗均购自福建迈新生物技术开发有限公司。

1.3 免疫组化方法及阳性判定 按照试剂盒说明步骤操作，在自动免疫组化染色仪将样本固定、包埋、切片，染色固化。在显微镜下观察照相，以图文分析系统进行数据分析。以细胞膜、胞质内出现棕黄色颗粒为AnnexinⅡ阳性表达。阳性判定在双盲法下进行，依据参考文献[5]的方法，即：每张切片在光镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个瘤细胞，着色强度分为，无色(-)为0分、浅黄色(+)为1分、黄色及更深颜色(++)为2分。阳性细胞数<10%为0分，10%～50%为1分，>50%为2分。两项得分相乘，结果≥2分为阳性病例，<2分为阴性病例。

1.4 统计学处理 所有数据采用SPSS15.0统计学软件包进行统计学分析，不同食管组织中AnnexinⅡ的表达的比较应用χ2检验，AnnexinⅡ与食管鳞癌临床病理特征间的关系采用Spearman相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中AnnexinⅡ蛋白的表达 AnnexinⅡ阳性表达为在细胞膜、胞质内出现棕黄色颗粒(见图1～3)，本研究结果显示，AnnexinⅡ蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显高于配对的癌旁组织及正常的食管组织，差异具有统计学意义，具体数据见表1。

表1 不同胃组织中AnnexinⅡ的表达

组织类型例数(n)AnnexinⅡ表达阳性阴性阳性率(%)χ2值P值食管鳞癌组织41301173.178.534*0.000癌旁组织41142734.157.612#0.000正常组织100100

*:AnnexinⅡ在食管鳞癌组织与癌旁组织中表达的比较；#：AnnexinⅡ癌旁组织与正常组织中表达的比较。

2.2 AnnexinⅡ蛋白的表达与食管鳞癌临床病理特征间的相关性 Spearman相关分析结果显示，食管鳞癌组织中Annexin Ⅱ的表达水平与肿瘤分化程度及淋巴结是否转移相关(P<0.05)，而与年龄、性别、浸润深度、临床分期无关(均P>0.05)。见表2。

表2 AnnexinⅡ蛋白的表达与食管鳞癌临床病理特征间的相关性

3 讨论

人AnnexinⅡ蛋白最早作为一种酪氨酸蛋白激酶的作用底物被发现，具有结合磷脂、结合蛋白等诸多生理作用。 AnnexinⅡ蛋白的分子量为36 kD，其基因位于15q21-q22，含1.4 kb编码基因，有3个假基因分别位于4号、9号、10号染色体上，并由13个外显子和12个内含子组成[6]。

近年来国内外的相关研究表明，AnnexinⅡ的表达与诸多肿瘤的生长、浸润以及转移有着紧密联系。Nedjadi 等[7]的研究发现，AnnexinⅡ蛋白可与S100A6形成聚合体，共同促进胰腺癌细胞的迁移能力，由此推断AnnexinⅡ蛋白与胰腺癌的发展直接相关。Ohno 等[8]发现AnnexinⅡ蛋白通过参与细胞增殖及改变膜生理学特性来增加肾透明细胞癌的转移几率，并预测AnnexinⅡ蛋白的阳性表达是肾透明细胞癌是否转移的重要预测因子。国内苏红英等[9]观察AnnexinⅡ在人肝细胞癌中的表达情况，结果发现肝癌组织中Annexin Ⅱ mRNA的表达量高于癌旁肝组织和正常肝组织，是癌旁肝组织的3.38倍，是正常肝组织的4.42倍，由此推测AnnexinⅡ可能成为肝细胞癌临床诊断的新指标。党秋红等[10]探讨了乳腺癌浸润性导管癌组织中AnnexinⅡ蛋白的表达及其意义，结果发现AnnexinⅡ蛋白在浸润性导管癌中的表达率为90.00%(54/60)，明显高于在乳腺纤维腺瘤组织中的表达率，且AnnexinⅡ蛋白的表达与组织学分级及淋巴结转移相关。尽管如此，目前关于AnnexinⅡ蛋白与食管鳞癌的相关研究较少，因此在本研究中，我们探讨食管鳞癌与其配对癌旁组织及正常组织中AnnexinⅡ的表达及其意义。通过免疫组化结果显示，食管鳞癌组织中的AnnexinⅡ的表达阳性率远远高于癌旁胃组织及正常胃组织，差异具统计学意义。另外，食管鳞癌组织中Annexin Ⅱ的表达水平与肿瘤分化程度及淋巴结是否转移相关(P<0.05)，这说明AnnexinⅡ的高表达与食管鳞癌的恶性程度有密切的相关性。

目前有关AnnexinⅡ促进肿瘤发生、发展的机制研究开展尚不全面，现已知AnnexinⅡ在细胞中可以单体、异源二聚体和异源四聚体存在，多分布于细胞质与细胞膜。Mai等[11]研究中指出， AnnexinⅡ的异源四聚体主要在恶性肿瘤细胞表面分布，可作为多种蛋白酶及细胞外基质成份的结合位点或协同作用靶点，通过以下可能的途径产生作用：(1)具有减弱肿瘤细胞对细胞外基质成分粘附的作用，通过与抗粘附分子(如键生蛋白-C)反应释放更多蛋白酶，从而达到水解细胞外基质的目的；通过与t-PA、PLG、组织蛋白酶B等蛋白质协同反应，降解细胞外基质成分，促进新生血管的生成；(2)通过与某些因子例如血管形成因子(如VEGF) 与S-100A4相互作用，从而促进肿瘤新生血管形成，对肿瘤细胞侵犯周围组织的过程有协助；(3)通过和细胞骨架成分结合分子(如肌成束蛋白)、黏附分子(如ALCAM)的相互协同作用，促进肿瘤细胞对正常组织的局部浸润和远处转移。从以上几个可能途径推测，食管鳞癌的发生发展过程中，AnnexinⅡ可能通过促使上述这些蛋白酶以及其底物和相关分子相互作用，导致蛋白酶的前体活化、新生血管生成以及细胞外基质成分的降解，从而对肿瘤细胞从原发肿瘤处的脱离、转移、侵袭周围的正常组织的能力起到帮助作用，具体的机制研究将是我们下一步工作的重点。

综上所述，AnnexinⅡ有可能在食管鳞癌的生长、侵袭及远处转移等过程中起到了重要的作用，其有可能应用于临床作为评估食管鳞癌的恶性程度和预后的指标，并有望作为食管鳞癌早期的诊断依据及基因治疗的新靶点。

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The expression and clinical significance of AnnexinⅡ in esophageal squamous cell cancer

GAOXiying,ZHANGYinghao,ZHANGRongjie

(DeparomentofEndoerinology,RongchengPeople’sHospital,AffiliatedHospitalofTaishanMedicalCollege,Rongcheng264300,China)

GAOXiying,E-mail：qbtzsss@163.com

Objective To expcore the expression and clinical significance of Annexin Ⅱ in esophageal squamous cell cancer and analyze the relationship between Annexin Ⅱ and clinicopathological features. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of AnnexinⅡ among 41 matched pairs of esophageal squamous cell cancer tissues and 10 cases of normal esophageal tissues. Results There were obviously differences in the expression of Annexin Ⅱ in esophageal squamous cell cancer tissues, circa-cancerous tissues and normal esophageal tissues(P<0.05). In the specimens of esophageal squamous cell cancer, expression of Annexin Ⅱ related to cell differentiation of tumors and metastasis of lymph node, no relation to age, sex, depth of invasion and clinical stage(P>0.05). Conclusions The expressions of Annexin Ⅱ had important effect in development and growth in esophageal squamous cell cancer, and might become a diagnosis index and treating target in clinic treatment.

annexinⅡ; esophageal squamous cell cancer; lymph node metastasis; tumor cell differentiation

264300 山东 荣成，荣成市人民医院 泰山医学院附属医院 消化科

高夕英，女，主任医师，擅长于消化专业，对肝胆疾病、消化道炎症、溃疡、出血、中毒、肿瘤等的治疗 尤其突出，E-mail: qbtzsss@163.com

10.3969/j.issn.1674-4136.2015.02.005

1674-4136(2015)02-0086-03

2014-08-16] [本文编辑：刘 嘉]