RP-H PLC测定酚酞片的含量

逯小萌

（濮阳市食品药品检验所，河南濮阳457000）

RP-H PLC测定酚酞片的含量

逯小萌

（濮阳市食品药品检验所，河南濮阳457000）

目的：建立酚酞片含量测定的反相高效液相色谱法。方法：色谱柱为Thermo-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45），流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，检测波长为275 nm。结果：酚酞进样量在0.150 7～1.506 6 μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.999 8，平均回收率为99.36%，RSD= 0.35%（n=9）。结论：该方法准确度、灵敏度及重复性均较好，可作为酚酞片的含量测定方法。

酚酞片；反相高效液相色谱法；含量测定

酚酞片为白色或微黄色片，药品别名轻泻片，用于治疗习惯性顽固性便秘，收载于《中国药典》2010年版二部［1］，标准中含量测定项使用紫外分光光度分析方法进行测定。本研究建立反相高效液相色谱法测定酚酞片的含量，该方法简便准确、专属性强、重现性好，可以更好地控制酚酞片的质量。

1　仪器和试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；G1314B型Agilent 1200可变波长检测器（美国安捷伦公司）；H4033A型色谱工作站（美国安捷伦公司）；Precisa92SM--202A型电子天平（瑞士普利赛斯公司）；UVIKON XL型双光束扫描紫外/可见分光光度计（法国赛克曼公司）；KS-500E11型超声仪（宁波海曙科生超声设备有限公司）；0.45 μm微孔滤膜（天津市津腾实验设备有限公司）；酚酞对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100091-199601，供含量测定用）；酚酞片（山西亨瑞达制药有限公司：批号141107，140103，141205，规格均为50 mg）；甲醇、乙醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Thermo-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：275 nm；进样量：20 μL。理论板数＞5 000。按此色谱条件进样测定，色谱图见图1。

2.2溶液的制备

取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于酚酞50 mg），置100 mL量瓶中，加乙醇适量，超声使酚酞片溶解，放冷，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液［2-5］。精密称取酚酞对照品25.11 mg，加乙醇适量，超声使其溶解，放冷，用流动相稀释至浓度为50 μg/mL的溶液作为对照品溶液；按供试品溶液制备方法制备不含酚酞的溶液，即得阴性对照溶液［2-5］。

2.3方法学考察

2.3.1专属性试验分别精密吸取经微孔滤膜滤过的对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。由图1可见，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，阴性对照溶液无干扰，证明方法可行。

2.3.2线性关系考察精密吸取经微孔滤膜滤过的对照品溶液3，5，10，15，20，25，30 μL注入液相色谱仪，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程：

Y=38.066X-0.835 4，

r=0.999 8（n=7）。结果表明，酚酞在0.150 7～1.506 6 μg范围内线性关系良好。

图1　酚酞高效液相色谱图

2.3.3精密度试验精密吸取经微孔滤膜滤过的同一供试品溶液20 μL，注入高效液相色谱仪，重复6次。结果峰面积平均值为768.66，RSD= 0.25%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3.4稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，10，12，24 h进样20 μL，结果峰面积的平均值为771.22，RSD=0.27%（n=8）。表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.3.5重复性试验取同一批样品，按拟定方法平行制备6份供试品溶液，分别进行测定。结果得RSD=0.29%（n=6），表明该方法重复性良好。

2.3.6加样回收率试验精密量取已知含量的同一批号的样品（山西亨瑞达制药有限公司，批号：141107，规格：50 mg，平均片重0.111 1 g）9份，加入适量对照品依“2.2.2”项下拟定的方法配成高（120%）、中（100%）、低（80%）3个量级的样品溶液，进行测定，计算回收率和RSD值，结果见表1。

表1　酚酞加样回收试验结果

2.4样品含量测定

分别精密量取3批样品适量，依法制备供试品溶液并进样测定，用外标法计算酚酞片的含量，并与《中国药典》2010年版二部方法进行比较，结果见表2。

表2　样品含量测定结果（%）

3　讨论

在试验波长的选择上，取对照品溶液在UVIKON XL型双光束扫描紫外/可见分光光度计200～300 nm波长范围内进行扫描，测得在229 nm与275 nm波长处有最大吸收。因为大多数溶剂都在短波长处有最大吸收，为了减少干扰和得到准确的数据［3］，故选择275 nm为检测波长。

在流动相及其比例的选择上分别选择了甲醇∶水、乙腈∶水、甲醇∶乙腈∶水及甲醇-0.1%磷酸二氢钾等进行试验，结果用甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45）作为流动相，样品主成分峰型良好，峰型尖锐，保留时间合理，且阴性对照溶液峰对其无干扰，分离效果满意，故选择甲醇∶乙腈∶水（25∶30∶45）为流动相。

采用RP-HPLC测定酚酞片的含量，操作简单易行，重现性好，准确度高，线性关系良好，提高了含量测定结果的准确度，与《中国药典》2010年版二部紫外分光光度法的测定结果比较基本一致，可用于酚酞片含量的测定。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：882.

［2］王玫，曹霞.HPLC法测定酚酞片的含量探讨［J］.黑龙江医药，2009，22（3）：260-261.

［3］孙银华.HPLC法测定酚酞片中酚酞的含量［J］.中国实用医药，2011，6（25）：15-16.

［4］万庆，钱世兵.RP-HPLC法测定酚酞片的含量［J］.安徽医药，2006，10（12）：922-923.

［5］胡丹.RP-HPLC法测定酚酞片中酚酞的含量［J］.中国现代医生，2013，51（23）：81-82.

Content Determination of Phenolphthalein Tablets by RP-HPLC

Lu Xiaomeng
（Puyang Municipal Institute for Food and Drug Control，Henan Puyang 457000，China）

Objective：To establish a method to determine the content of phenolphthalein tablets by reversed phase high-performance liquid chromatography（RP-HPLC）.Methods:The chromatographic column was Thermo-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）with a mobile phase of methanol-acetonitrile-water（25∶30∶45），the flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was at 30℃，and the detection wavelength was at 275 nm.Results:A good linear relationship was showed between the peak area and phenolphthalein sample volume of 0.150 7～1.506 6 μg，r=0.999 8.The average recovery rate was 99.36%，RSD=0.35%（n=9）.Conclusion:The method is accurate，sensitive and repeatable，and can be used for the content determination of phenolphthalein tablets.

Phenolphthalein Tablets；RP-HPLC；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.10.003

2015-06-10）

逯小萌，男，主管药师。研究方向：药品检验。E-mail：lumeng911@163.com