微生物检定法在抗生素质控分析中的应用

金桂花，安贤兰

延边州食品药品检验所，吉林延吉133000

微生物检定法在抗生素质控分析中的应用

金桂花，安贤兰

延边州食品药品检验所，吉林延吉133000

微生物检定法作为常量、微量分析中的最常见检测方法之一，其近年来的应用呈现逐年递增的趋势，这与高效液相色谱法的应用有关。该文就微生物检定法进行分析，总结其在抗生素质控中的实施价值以及具体方法，分析未来发展以及应用的趋势。

微生物检定法；常量分析；微量分析；抗生素；质控

所谓微生物检定法，就是指将抗生素对微生物的杀伤以及抑制指标作为衡量标准的抗生素效价方法之一[1]。在研究过程中，一般需要确保供试品以及已知效价的标准品之间的对比才能确保效价。以抗生素为例，在实验的过程中抗生素分子结构以及组成等方面均显示出较为复杂的一面，而在药物进行开发的早期阶段，不存在专属的化学测定方法，因此，微生物鉴定方法因其具有直观结果的特点成为了抗生素含量测定的基本方法之一。现对微生物检定法在抗生素质控分析中的应用以及进展进行如下分析。

1 抗生素常量

1.1 抗生素成品质量控制工作分析

对微生物检定法进行分析，其涉及到管碟法、稀释法、比浊法3个类别[2]。其中，稀释法检定结果仅能测定两个浓度的范围，无法得到有效的绝对数值，所以具有应用上明显的局限性特点，一般不予以采用。与稀释法进行对比，比浊法具有获得结果快速的特点，一般均可在当天得到检定结果，且整个方法操作上相对简单，易于操作，使用液体培养基，不会受到扩散因素的影响，方法执行中借助仪器，具有高精密度、高灵敏度的特点[3]。但是从此方法的不足上进行分析，比浊法可能受到培养时间、培养温度情况以及培养管等因素的影响造成抗生素效价不准确的测定结果。所以，目前最为常用的微生物检定方法是管碟法。抗生素微生物检定法特点：较高的灵敏度，能够对抗生素抗菌效价有一个直接且明确的显示，但是整体操作的步骤相对较多，且需要经历较长的实验研究时间，另外对于实验操作人员的技术以及操作能力均提出较高要求，以保证实验结果和真实值之间的接近，降低误差问题。微生物检定法的要求之一就是标准品、供试品一定要是同质的抗生素，不同质抗生素可能会出现曲线不平行问题[4]。

1.2 抗生素工业生产中间品质控

微生物检定法分析的周期时间较长，且操作过程相对复杂，所以在抗生素工业生产中的中间品质控中很少使用此方法。抗生素生产中含量测定，其目的是对生产执行过程进行优化控制，所以对抗生素的分析法要求简单以及快速，对于方法具有的灵敏度、特异度没有较高的要求[5]。例如在对链霉素生产时，效价的测定可以采取麦芽酚显色法，而不需要采用微生物检定法。近年来，为了适应工业自动化控制的需求，开始对自控分析方向进行研究，自动分析仪器涉及到采样器、反应器、检测器等部件，能够从取样一直到获得结果均在自动化条件下完成[6]。就工业化生产而言，其控制的理想方法是生物传感器分析，例如微生物电极、酶电极等，借助生物传感器在抗生素发酵中进行含量分析，并进行有效的监测工作。

2 抗生素微量

2.1 体内抗生素

从机体组织器官中药物的分布情况来看，当机体内吸收及代谢效用评价时，为了能够确保临床的安全性，一般需要对其采取血药浓度进行监测，这就需要分析体内抗生素含量。一般情况下，在体液中抗生素的浓度相对较低，但在实际测定的过程中，因其具有较多的干扰因素，加上抗生素代谢物具有抗菌活性的特点，导致在体内抗生素分析中，微生物鉴定法在实际鉴定中的特异度不高。因此，很多检测方法开始应用于生物体内抗生素分析中，其中包括生化分析法以及免疫测定法等。就当前来看，在体液测定的过程中最常用方法是HPLC技术，主要原因在于此方法在检测的过程中具有较高的灵敏度以及特异性，因而成为体内药物测定的常规方法代表[7]。

2.2 残留抗生素

在残留抗生素中关于微生物检定法的应用也是有相关报道的，例如动物组织中的残留抗生素[8]。近年来，伴随抗生素在饲养业中的应用研究，在牛奶中存在的抗生素残留问题变得越来越明显。检测牛奶中是否存在残留的抗生素，应用微生物检定法较为普遍，检测方法中包含纸片法与TTC法，其中TTC法已经成为食品卫生标准中规定的抗生素残留检测法。传统微生物检测，因其具有较长的检测时间以及相对较大的误差，加上操作过程的复杂，使得理化检测方法的应用越来越广泛[9]。除此之外，随着计算机技术的广泛发展和应用，在一定程度上加速了联用技术的发展，其中包括液质以及气质联用。近年来，随着接口技术的改进，作为一种质量流速型检测器，质谱正以较快的速度开始应用于残留分析的检测工作中，免疫法也广泛地应用于残留抗生素的检测工作中[10]。对比常规理化分析技术，免疫分析技术在实际应用中具有明显的优势，例如整个操作的过程相对简单，研究获得实验结果的速度较快，分析过程所需要的成本相对较低等。就当前为止，牛奶中的残留抗生素检测已经建立了系统的免疫测定法。

就抗生素而言，无论是常量检测，还是微量检测，微生物检定方法都成为了最为常规的方法之一，但是微生物检定方法被HPLC替代是时代、技术发展下的必然趋势。HPLC作为20世纪70年代后发展最快的分析化学分支，具有高效、快速、灵敏特点的分离分析手段。HPLC的分离检测过程相对较为温和，对于沸点高、分子量大的化合物的处理能力较强，所以应用的范围变得越来越广泛。

虽然微生物检定方法在抗生素药物分析中目前所占据的比例以及应用的范围开始变小，但是抗生素药品的医疗作用主要表现在抗菌效力，所以借助抗菌效力来检定和表示含量还是有实际意义的。

若在实验中，检定菌与临床致病菌生理特性相似，检测的结果便会与临床应用的效果保持平行关系，此时微生物检定法对比化学法、物理法更为契合实际。作为抗生素药品含量测定的常用方法之一，因其具有较高的灵敏度、临床疗效确切等优势而广泛应用。在《中国药典》中明确指出了不可收录的品种，包括克拉霉素、罗红霉素、阿奇霉素、红霉素等，这些药物的含量测定均由HPLC技术开展。由此来看，微生物检定方法进行含量测定的比重将不断缩小，HPLC法具有明显的替代趋势，当然目前还未形成这一局面，未来发展中还需要进一步加以研究。

3 结语

综合该文研究内容来看，该文就抗生素的常量、微量两方面进行分析，论述微生物检定法的应用情况。从文章研究内容来看，微生物检定法在抗生素含量测定中的比例开始逐渐下降，高效液相色谱法在未来的应用价值更为明显，但是目前还未形成这一特点，未来的应用中还需要不断进行研究和反复论证。

[1]邰顺章,王晓晶.抗生素微生物检定法中滴加抗生素溶液方法的研究[J].药学与临床研究,2015(3):271-273.

[2]于佳,张鑫,刘云飞,等.抗生素微生物检定法测定注射用磷霉素钠含量的不确定度分析[J].黑龙江医药,2014(1):1046-1048.

[3]张肖群,饶春意,童惠贞,等.微生物检定法测定注射用盐酸博莱霉素含量[J].中国药学杂志,2003,38(12):958-960.

[4]李广英.浅谈单双层培养基对抗生素微生物检定法的影响[J].中国科技博览,2011(29):323.

[5]H VanderhaegheReplacement of microbiological assays of antibiotics based on high-performance liquid chromatography[J].Journal of Pharmaceutical&Biomedical Analysis, 1989,7(1):127.

[6]AF Zuluaga，M Agudelo，CA Rodriguez，O VesgaApplication of microbiological assay to determine pharmaceutical equivalence of generic intravenous antibiotics[J].Bmc Clinical Pharmacology,2009,9(1):1.

[7]李婧,杜娟,陈征,等.抗生素微生物检定二剂量管碟法常用菌种培养的研究[J].首都医药,2011(14):23-24.

[8]李伟革,张连彦,赵营,等.抗生素微生物检定及比浊法在效价测定中关键控制点[J].饲料研究,2010(12):36-37.

[9]李霞.微生物检定法在抗生素质控分析中的应用[J].中国药业,2004,13(9):21-23.

[10]纪国力，刘飞.抗生素微生物检定法的影响因素及控制方法[J].齐鲁药事,2006,25(7):412-414.

Application of Microbiological Assay in the Analysis of Quality Control of Antibiotics

JIN Gui-hua,AN Xian-lan
Yanbian Food and Drug Inspection Institute,Yanji,Jilin Province,133000 China

Microbiological assay,as the most common test method in the analysis of quality control of antibiotics,the application in recent years has taken on an increasing trend,which is related to the application of high performance liquid chromatography,the paper analyzes the microbiological assay,summarizes the implementation value and specific method of it in the quality control of antibiotics and analyzes its future development and application trend.

Microbiological assay;Constant analysis;Microscale analysis;Antibiotics;Quality control

R7

A

1672-5654（2016）12（a）-0061-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.34.061

2016-09-05）

金桂花（1981.1-），女，朝鲜族，吉林龙井人，本科，主管药师，研究方向：药品检验。