单采血小板保存期内各项生化标志物的动态变化*

石洁 段志倩 郑建勇

单采血小板保存期内各项生化标志物的动态变化*

石洁 段志倩 郑建勇

目的 探讨单采血小板在保存期内血小板数量、形态、功能的各项指标变化。方法 采用血细胞计数仪计数血小板数量，使用光镜观察血小板形态，同时测定葡萄糖、乳酸浓度以及血小板P选择素（CD62p）和血小板聚集功能。结果 单采血小板在体外保存过程中，血小板计数和pH值在保存第5天时明显降低；血小板形态学计分在第3天起显著降低；葡萄糖浓度呈逐渐下降，而乳酸浓度呈逐渐升高趋势；血小板聚集功能逐渐降低，保存第3天、第5天与第1天相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 单采血小板在体外保存期间形态和功能发生动态改变，保存3 d内血小板形态和功能基本维持稳定。

单采血小板 保存 血小板P选择素 聚集

随着输血医学的快速发展，单采血小板（apheresis platelets）已经广泛地应用于临床医学。血小板输注疗效确切，是临床治疗各种血液疾病、颅脑损伤、恶性肿瘤、感染性休克、创伤性大出血等急、危、重症疾病的重要手段[1]。由于血小板极为脆弱，在机体血液循环中寿命仅为8～10天，离体后易发生变形和破坏，因此，在血小板采集过程中加强对血小板制品的质量控制是保证血液制品临床疗效的重要环节[2]。本文研究了单采血小板在保存期内血小板数量、形态、功能的各项指标变化，分析并探讨其相互间的关系，现将结果报告如下。

材料与方法

1 材料

1.1 样本收集与处理：2016年3～8月，按照《献血者健康检查标准要求》（GB18467-2011）筛选并收集了成分献血者捐献的单采血小板样本60份。所有献血者在捐献单采血小板前1周内均未服用任何抗菌药物或能影响血小板功能的药物。单采血小板使用MCS+血细胞分离机采集，每单位血小板浓度为（2.5～3.0）×1011个。将采集的血小板充分混匀后，使用与血小板保存袋性质相同的样品袋留取5～6 ml血小板样本，置（22±2）℃血小板振荡保存箱内水平振摇保存5 d。在血小板采集的第1天、第3天和第5天分别进行血小板计数、血小板形态计分、葡萄糖含量、乳酸浓度、血小板P选择素（CD62p）和血小板聚集功能检测。

1.2 仪器与试剂：MCS+血细胞分离机（美国血液技术公司），血小板恒温振荡保存箱，光学显微镜（日本Olympus），Sysmex-800i型血细胞计数仪（日本Sysmex），Sysmex血细胞计数试剂（日本Sysmex），pHS-3C型pH计（上海雷磁），血小板聚集仪（美国CHRONO），Neubauer计数板，葡萄糖检测试剂盒（中生北控生物科技有限公司）、乳酸检测试剂盒（中生北控生物科技有限公司），血小板P选择素（CD62p）检测试剂盒（美国TSZ），ADP试剂（美国Sigma）。

2 方法

2.1 血小板计数及生化指标检测：在单采血小板采集的第1天、第3天和第5天，用Sysmex-800i血细胞计数仪进行血小板计数，用pH计测定血小板pH值，按试剂说明书进行葡萄糖含量、乳酸浓度和血小板P选择素检测。

2.2 血小板形态学计分检测：吸取50μl血小板样本进行20倍稀释后混匀，在100倍油镜下观察血小板形态并计分，参照Kunicki形态评分方法[3]：计数100个血小板，圆盘状计4分，球形计2分，树突状计1分，气球状计0分，累计总分。

2.3 血小板聚集功能检测：用10 μmol/L ADP作聚集诱导剂进行血小板聚集功能检测。取2支试管标记为贫血小板血浆（PPP）和富血小板血浆（PRP）。吸取样本 2 ml 3 000 r 离心10 min，吸500 μl上清于PPP；吸取样本0.2 ml，3～5倍稀释PPP，将血小板计数调至（2 500～3 000） ×109/ L，用PPP调零，将PRP加入测试杯，加磁力搅拌珠，37℃温育5 min后加入8 μl ADP，血液聚集仪测定8 min血小板聚集曲线和血小板最大聚集率。

3 统计学处理 应用SPSS16.0软件进行统计分析，计量资料采用t检验，计数资料采用卡方检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

通过对60例单采血小板样本进行保存期内数量、形态和功能的动态检测，发现体外单采血小板在保存期的不同时间点血小板数量、形态和功能发生了动态改变。研究结果显示，单采血小板在保存期内血小板计数呈下降趋势，在保存第5天血小板计数与第1天相比显著下降（P＜0.05）；血小板形态学计分也逐渐下降，保存第3天和第5天与第1天相比，血小板形态受损，形态学分值显著降低（P＜0.05）；血小板的pH值和葡萄糖呈进行性下降，保存第5天pH值和葡萄糖含量比第1天显著降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。此外，保存第3天时葡萄糖含量与第1天相比差异亦有统计学意义（P＜0.05）。然而，检测乳糖含量结果显示，随着保存时间的延长乳糖浓度增加，保存第3天和第5天与第1天的差异有统计学意义（P＜0.05）；不仅如此，血小板P选择素（CD62p）水平随保存时间逐渐升高，第3、5天的水平显著高于第1天，差异具有统计学意义（P＜0.05）。血小板聚集功能在血小板保存期间逐渐降低，血小板最大聚集率在保存第3、5天显著低于第1天，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 单采血小板保存期内各项指标动态变化（n=60）

讨 论

国家标准[4]规定单采血小板在体外保存条件为（22±2）℃振荡保存，时间仅为5 d。研究表明，血小板在体外保存时会出现损伤，在一定程度上影响血小板输注后的活力和功能[5]。血小板离体后随着温度降低其形态将发生改变，由盘状变成球状，容易聚集和破坏。血小板一旦失去了正常形态，也就失去了快速凝集功能。血小板形态计分是一种用于血小板形态学检查的规范方法，可以较好地分析和评价血小板形态。随着离体时间的延长，单采血小板中乳酸浓度增加将导致pH值降低[6]。此外，血小板的质量还体现在血小板的聚集功能、粘附功能、血块收缩实验、分泌功能、膜表面促凝血活性的功能等方面[7]。

本研究分析了单采血小板在保存期内血小板数量、形态、功能的各项指标变化。结果显示，在体外保存3天内，血小板计数没有显著差异，在第5天时，血小板计数明显降低。利用血小板形态计分法观察血小板形态，在保存第3天开始，血小板形态计分降低，表明血小板形态开始受损，血小板形态分值与第1天相比差异有统计学意义（P＜0.05）。随着保存时间的延长，血小板形态分值呈下降趋势。

在血小板功能改变的过程中，血小板pH值是一项不可忽视的指标。有研究证实，血小板在pH＜6时存活时间显著降低[8]。本研究发现，血小板pH值在体外保存3天内无显著改变，而在保存第5天明显降低，与第1天相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。由于糖酵解是血小板重要的代谢途径，而糖酵解的终产物是乳酸。乳酸含量增加到一定程度时可引起血小板pH降低。因此，本研究检测了血小板在体外保存过程中葡萄糖和乳酸的含量变化。发现单采血小板随着体外保存时间的延长，葡萄糖浓度降低，乳酸含量增加。保存第3天、第5天与第1天相比，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。

血小板P选择素（CD62p）即血小板α颗粒膜蛋白140，在血小板活化后可表达于血小板膜表面，可作为血小板活化的分子标志物[9]。本研究采用流式细胞术检测CD62p，结果显示，随着血小板保存时间延长，CD62p水平逐渐升高，第3、5天显著高于第1天，差异具有统计学意义（P＜0.05）。除此以外，通过检测血小板聚集功能发现，随着血小板保存时间延长，血小板聚集能力逐渐降低，最大聚集率在保存第3、5天显著低于第1天，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

由此可见，在离体状态下，血小板功能呈降低趋势。本研究结果提示，血小板形态和功能在保存3天内基本稳定，而在保存第5天时，血小板形态与功能出现较大改变。因此，尽管单采血小板的保存时间为5 d，但在采集制备3 d内输注可达到较好的效果。

1 Landzo E，Sofo-Hafizovic A，Cetkovic-Bas ic V. Initial values of donor hematocrit and efficiency of plateletpheresis [J].Acta Inform Med，2013，21（2）：116-119.

2 陆庆屯.血小板形态MPV PDW值的差异对单采血小板收集量的影响与对策[J].临床输血与检验，2016，18（5）：459-461.

3 Kunicki TJ，Tuccelli M，Becker GA，et a1.A Study of variables affecting the quality of platelets stored at "Room temperarure" [J].Transfusion，1975，15（5）：414-421．

4 GB18469-2012.全血及成分血质量要求[S].

5 段本荣.单采血小板与手工分离血小板质量及输注效果的对比研究[J].中国医药指南，2015，13（25）：154.

6 Ringwald J，Haager B，Krex D，et al.Impact of different hold time before addition of platelet additive solution on the in vitro quality of apheresis platelets [J].Transfusion，2006，46（6）：942-948.

7 楚杜武，任军伟，丛玉隆.血小板聚集功能检测方法及参数的探索与研究[J].国际检验医学杂志，2016，37（16）：2270-2272.

8 Tynngard N，Trinks M，Berlin G.In vitro properties of platelets stored in three different additive solutions [J]. Transfusion，2012，52（5）：1003-1009．

9 Picker SM，Tauszig ME，Gathof BS.Cell quality of apheresis-derived platelets treated with riboflavinultraviolet light after resuspension in platelet additive solution [J].Transfusion，2012，52（3）：510-516.

The Dynamic Change of Various Biochemical Markers during the Preservation of Apheresis Platelets

SHI Jie，DUAN Zhi-qian，ZHENG Jian-yong.
Nanjing Red Cross Blood Center，Quality management Department，210003

Objective To Analyze and discuss the changes in number，morphology，and function in the preservation period of apheresis platelets.Methods Countand observe the morphologyof platelets while determinethe glucose，lactic acid concentration，platelet P-selectin （CD62p） and platelet aggregation function.Results During in vitro preservation，platelets count and PH value were significantly lower when it comes toDay 5.Platelet morphology score significantly declined since the third day.The glucose concentration gradually decreased and lactic acid concentration showed a trend of rising.Compared with Day1，platelet aggregation function gradually reduced （P＜0.05） in Day 3 and Day 5.Conclusion During in vitro preservation period of apheresis platelets，the platelet morphology and function dynamically changed，but were stable in the first three days.

Apheresis platelets Preservation Platelet P-selectin Aggregation

R331.1+43

A

1671-2587（2017）04-0325-03

2017-02-12）

（本文编辑：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.04.004

*本课题受南京市卫生局一般性项目（No.14171）资助

210003 江苏省南京红十字血液中心质量管理科

石洁（1986–），女，江苏盐城人，检验技师，硕士，主要从事微生物学检验、血液产品质量控制与管理工作，（Tel）13601463830（E-mail）599066727@qq.com。

郑建勇，主管技师，主要从事血液产品质量控制与管理工作，（Tel）13813900291（E-mail）417618163@ qq.com。