人抗鼠抗体干扰导致献血者HBsAg、HIV酶免检测假阳性1例

丁卫平 李晶

·个例报告·

人抗鼠抗体干扰导致献血者HBsAg、HIV酶免检测假阳性1例

丁卫平 李晶

献血者 人抗鼠抗体 酶免假阳性

采供血机构对献血者血液标本采用血清学技术和核酸扩增检测技术进行人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、梅毒螺旋体（TP）感染标志物的检测[1]。目前核酸检测尚未全面实施，国内血站多数采用2次酶联免疫吸附试验（ELISA），ELISA自动化程度高、操作简便、灵敏度高，适用于大批量标本测定，但ELISA实验原理会因检测试剂批次的不同、献血者免疫学状态不同或体内干扰物质等因素干扰实验结果[2，3]。现于2015年10月发现1例因人抗鼠抗体（HAMAs）干扰造成献血者HBsAg、HIV 双项ELISA检测结果假阳性的情况，报告如下。

对象与方法

1 对象 女，45岁，宝鸡山区农民。于2015年10月13日首次自愿无偿献血，经健康咨询，符合献血要求。献血者既往健康，体格检查：体温36.2℃，血压125/80 mmHg，心率70次/min，初筛HBsAg金标快筛阴性，谷丙转氨酶（ALT）13 U/L，符合《中华人民共和国国家标准》GB18467-2011献血者健康检查要求。献血者自愿献血400 ml，静脉穿刺顺利，献血过程中无不良反应。

2 方法 2015年10月14日献血者EDTA抗凝标本在血站实验室采用全自动加样系统（TECAN EVO-150），全自动酶免后处理系统（SIEMENS BEPIII），用两家酶免试剂检测，其中HBsAg 、HIV项目两家均为阳性。HBsAg采用上海科华、北京万泰两步法试剂，HIV采用法国伯乐、北京万泰第4代抗原抗体联合检测试剂。用HBsAg 、HIV胶体金试验（上海科华试剂）均为阴性，罗氏核酸检测（PCR）HBV/HCV/HIV联合混检和单检均为阴性。为验证是否标本留取有误，对献血者原袋血浆标本也进行了酶免、胶体金、核酸检测。

结 果

1 献血者的标本、原袋血浆检测结果见表1。献血者标本与原袋血浆结果一致，排除标本留取错误，怀疑献血者体内有非特异性干扰物质影响了酶免试验，造成假阳性结果。与献血者沟通联系，证实其为山区畜牧户，饲养羊，羊圈中老鼠较多，献血者3年前曾被老鼠咬过。根据上述信息，初步考虑可能因人抗鼠抗体（HAMAs）干扰造成HBsAg、HIV假阳性，HAMAs免疫干扰主要表现在两步夹心法为原理的免疫分析中[4]，本实验室检测HBsAg采用双抗体夹心法，HIV为ELISA双抗原及双抗体夹心法。为验证分析结论，将献血者血浆标本送至宝鸡市疾病预防控制中心做人抗鼠抗体ELISA试验和HIV确证试验（Western blot）。疾控中心采用R&D systems HAMA ELISA分析试剂盒，测定该献血者血浆HAMAs浓度为30.5 ng/ml（正常参考值：5.0～12.5 ng/ml），采用北京万泰HIV1+2型抗体检测试剂盒检测结果为阴性。2 验证试验结果见表2。将HBsAg试验第2步所加酶用同厂家HIV的酶替代，HIV试验第2步所加酶用同厂家HBsAg的酶替代，其余阴阳性对照及质控孔正常加入。在原本应结果为阴性的试验中出现阳性结果，简单证实对酶免试验干扰物质的存在。

表2 献血者HBsAg 、HIV试验酶交叉检测结果

综上结果证实，本例献血者HBsAg 、HIV项目双阳性结果是由HAMAs引起，与输血相关传染病无关。

讨 论

自动化、信息化程度较高的酶免全自动分析系统被绝大多数采供血机构使用，但ELISA测定会受诸多因素干扰，如试剂批次不同、免疫状态不同、标本内源性或外源性干扰物质而影响实验结果，造成假阴性或假阳性结果。内源性干扰因素一般包括类风湿因子（RF），补体，高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体，某些自身抗体，人抗鼠抗体（HAMAs）等。HAMAs是针对特定免疫原的高亲和力、特异性多克隆抗体，包括IgG、IgA、IgM及少部分IgE，有动物免疫球蛋白刺激产生的独特型及抗同种型两种抗体，对免疫学实验结果的干扰作用是在双位点夹心免疫测定中，标本中存在的HAMAs在鼠Ig捕获抗体与鼠Ig标记物之间起桥联作用而对实验产生干扰进而导致假阳性结果。有报道HAMAs可干扰疾病诊断，影响药物疗效监测及免疫制剂的治疗，在患者标本的发生率为30%～40%[5]，在献血者标本为1%～2%[6]。本例酶免检测HBsAg、HIV假阳性结果源于献血者体内有HAMAs。我站规定，HIV初筛阳性标本送市疾控中心做确认实验前须做胶体金快筛试验，发现酶免与胶体金实验结果不符，随后进行核酸检测，从而发现此例献血者假阳性。

综上所述，建议血站应对输血相关传染病血清学检测反应性标本进行确认试验，确认方法分两类：一是特异性抗原确认的中和试验如HBsAg，二是特异性抗体确认的免疫印迹或荧光抗体试验，如抗-HCV，抗-HIV和梅毒抗体。当酶免检测出现双项或多项阳性结果时，实验室应采用另一种检测方法来验证是否存在干扰因素，若两种方法检测结果不符，怀疑存在HAMAs干扰时，可采取：①与献血者沟通是否存在接触史，送检标本有无检测怀疑抗体；②样本梯度稀释试验：样本系列稀释后测得的数值不成比例，呈非线性关系，提示存在干扰物；③酶免单克隆抗体试剂大多使用鼠抗体来标记，可将同一品牌试剂不同项目的酶交叉使用，看是否存在干扰。

HAMAs是临床较常见的人抗动物循环抗体，会对免疫实验结果产生重大影响[7]。建议试剂厂家在研制夹心法免疫测定试剂盒时应采取相应措施，减少HAMAs干扰，如使用鼠单克隆抗体，并在试剂说明书中对HAMAs干扰进行说明。

1 中华人民共和国卫生部. 血站技术操作规程[S] .2015.

2 段友斌，寸伟.ELISA实验室内质控失控的回顾性分析[J].临床输血与检验，2014，16（1）：72-74.

3 李金明.感染性疾病血清学检验中应重视对弱反应性标本的确认[J].中华检验医学杂志，2006，29（7）：577-580.

4 龚跃云，欧阳芳，吴豫 .新两步法和一步法检测乙肝表面抗原的比较[J]. 临床输血与检验，2012，14（3）：241-243.

5 杨嫣鹊.HIV酶免试剂在献血者标本重点监测效果分析[J].临床输血与检验，2015，17（4）：370-371.

6 陈会强.人抗鼠抗体HAMAs干扰导致BNP假阳性一例[D].浙江大学医学院 浙江大学，2010（硕士论文）.

7 王志刚，曹浩强.人抗鼠抗体效应对临床免疫学检测的影响[J]. 中华检验医学杂志，2007，30（1）：68-70.

（本文编辑：姚萍）

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1671-2587（2017）04-0404-02

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.04.027 作者单位：721006 陕西省宝鸡市中心血站 作者简介：丁卫平（1979–），女，陕西宝鸡人，主管检验师，主要从事血液检测工作，（Tel）13571183542。

ELISA检测 胶体金检测核酸检测ALT（U/L）科华试剂混检单检结果S/CO值结果S/CO值结果S/CO值结果S/CO值HBsAg HIV HBsAgHIV HBV/HCV/ HIV万泰试剂 科华试剂伯乐试剂 万泰试剂科华试剂酶免标本阳性12.0阳性2.19阳性6.76阳性16.65阴性阴性 阴性 阴性 14原袋血浆阳性11.5阳性2.15阳性6.58 阳性15.59阴性 阴性 阴性 阴性 16

2016-09-30）