Tn抗原在宫颈癌组织中的表达及临床意义

王丹阳，李洋洋，王彬，向梅

·论著·

Tn抗原在宫颈癌组织中的表达及临床意义

王丹阳，李洋洋，王彬，向梅

目的：探讨Tn抗原在宫颈癌组织中的发生、发展中的作用，为宫颈癌的早期诊断、治疗提供一定的参考依据。方法：选择2013—2015年吉林大学第二医院的102例临床样本，其中正常宫颈组织14例，宫颈上皮内瘤变（CIN）组织22例，宫颈癌组织66例，采用免疫组织化学方法以半乳糖胺特异性凝集素蚕豆凝集素（vicia villosa lectin，VVL）作为抗体检测不同宫颈组织中Tn抗原表达情况。结果：Tn抗原极少表达于正常宫颈鳞状上皮（7.1％），在CIN和宫颈鳞癌中表达率分别为45.5％和68.8％，而在宫颈腺癌中表达率高达94.1％。在宫颈鳞癌中，Tn抗原的表达与是否存在淋巴结转移有关（r=0.363，P＜0.05）。在宫颈腺癌中，Tn抗原表达与肌层浸润深度有关（r=0.361，P＜0.05）。结论：Tn抗原可能作为宫颈腺癌的一种肿瘤标志物，有助于宫颈腺癌的筛查诊断，并可能更早地提示宫颈鳞癌淋巴结转移的潜在风险。

宫颈肿瘤；Tn抗原；宫颈上皮内瘤样病变；免疫组织化学

【Abstract】Objective：To investigate the expression of Tn antigen in cervical carcinoma.To explore the role of Tn antigen in the occurrence and development of cervical carcinoma，and to provide a reference for the early diagnosis，treatment of cervical carcinoma.Methods：We screened 102 cervical samples from the Second Hospital of Jilin University from 2013 to 2015，including 66 invasive cervical carcinomas，22 cervical intraepithelial neoplasia（CIN），14 normal cervical squamous epithelia，by immunohistochemistry using biotinylated vicia villosa lectin（VVL）.Results：The Tn antigen was rarely observed in normal squamous epithelium（7.1％），and was detected in 45.5％of CIN and in 68.8％of invasive squamous carcinoma，and was highly observed in 94.1％of invasive adenocarcinoma.In invasive squamous carcinoma，expression of Tn antigen was closely related to lymph node metastasis（r=0.363，P＜0.05）.In adenocarcinoma，the correlation was shown between Tn expression and depth of invation（r=0.361，P＜0.05）.Conclusions：Tn antigen could be used as a marker for cervical adenocarcinoma，and Tn antigen could indicate the potent risk of lymph-nodes metastasis in squamous carcinoma.

【Keywords】Uterine cervical neoplasms；Tn antigen；Cervical intraepithelial neoplasia；Immunohistochemistry （J Int Obstet Gynecol，2016，43：446-448）

近年宫颈腺癌的发病率逐年升高，由于腺癌的特殊性，现有的宫颈癌筛查手段（如宫颈细胞脱落法等）对宫颈腺癌早期诊断的价值有限。目前通过各种检测方法测定肿瘤标志物含量，为宫颈癌的辅助诊断、复发检测和预后判断提供了新思路，同时对于控制过度医疗也具有重要意义［1-2］。糖基化的异常改变是细胞癌变的一个重要特征，这些抗原称肿瘤相关糖抗原（tumor-associated carbohydrate antigen，TACA）。Tn抗原是一种与黏蛋白相关的TACA，大量的研究认为Tn抗原在多种上皮性腺癌中高度表达［3-5］。但目前关于Tn抗原在宫颈癌中的研究很少。本研究通过免疫组织化学方法以蚕豆凝集素（vicia villosa lectin，VVL）检测正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）组织及宫颈癌组织中的表达情况，探讨Tn抗原在宫颈癌发生、发展中的作用，为宫颈癌的诊治提供参考依据。

1　资料与方法

1.1临床资料收集吉林大学第二医院2013—2015年因子宫腺肌病、子宫肌瘤、CIN、宫颈癌等原因行子宫全切术及宫颈锥切术的临床标本102例，其中正常宫颈组织14例，CIN组织22例，宫颈癌组织66例（未经任何治疗，如放疗、化疗等，其中宫颈鳞癌32例，宫颈腺癌34例）。所有患者均按照国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）临床分期（2009）标准进行分期。

1.2方法手术均由妇科高年资肿瘤专科医生进行，手术标本均由2位有经验的妇科高年资病理学医师读片核对。所有的标本固定在10％福尔马林中，经过石蜡包埋，将石蜡组织切成4 μm厚的切片。采用免疫组织化学法检测Tn抗原。取4 μm厚石蜡组织切片，脱蜡、水化，5％过氧化氢甲醇溶液封闭（室温下30 min）；以10％羊血清室温30 min封片，以半乳糖胺特异性凝集素蚕豆凝集素（vicia villosa lectin，VVL，由Vector Labs，Burlingame，CA生产）1∶2 000稀释在室温下并与玻片反应30 min，以磷酸盐缓冲液（PBS）作阴性对照；随后加适度稀释过氧化物酶标记的链霉亲和素（Vector Labs），室温30 min；用二氨基联苯胺（DAB）显色，水洗，苏木素复染。常规脱水透明，中性树胶封固。

1.3结果判定每张切片均取5个高倍视野，每个视野计数大于100个细胞，根据抗原反应的阳性细胞百分比分为5个级别：0（＜5％），1+（5％～10％），2+（10％～25％），3+（25％～50％），4+（≥50％）。

1.4统计学方法用SPSS 19.0统计软件进行分析。定性资料用率表示，组间比较采用卡方检验和四格表确切概率法。等级资料组间比较采用秩和检验。Tn抗原阳性表达与宫颈癌病理因素的关系用Pearson列联系数表明变量间的关联程度。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1Tn抗原在不同宫颈组织中的表达Tn抗原主要表达于细胞膜及富有胞质的癌细胞中。在宫颈鳞癌中，Tn抗原主要分布在癌巢中央及边缘，主要表达于细胞质中；在宫颈腺癌中，Tn抗原主要分布在细胞膜表面及分泌物中，见图1（见封三）。Tn抗原极少表达于正常宫颈鳞状上皮（7.1％），在CIN和宫颈鳞癌中表达率分别为45.5％、68.8％，而在宫颈腺癌中的表达率高达94.1％。Tn抗原在宫颈正常鳞状上皮中的阳性表达低于其在CIN、宫颈癌中的表达，差异有统计学意义（χ2分别为5.918，29.979，均P＜0.05），其中宫颈腺癌组织中Tn抗原的阳性表达高于其在CIN、宫颈鳞癌中的表达，差异有统计学意义（χ2分别为16.870，7.131，均P＜0.05）。Tn抗原在宫颈癌中的染色评分高于CIN（Z=-5.070，P＜0.01），见表1。

表1　Tn抗原在各种宫颈组织中的阳性表达情况

2.2Tn抗原阳性表达与宫颈癌病理因素的关系在宫颈鳞癌中，Tn抗原的表达与是否存在淋巴结转移有关（r=0.363，P＜0.05），但与临床分期、组织学分级、肌层浸润深度以及淋巴脉管瘤栓无关（P＞0.05）。Tn抗原高度表达于宫颈腺癌中，其表达与肌层浸润深度有关（r=0.361，P＜0.05），但与其他临床病理特征无关（P＞0.05），见表2。

表2　Tn抗原的表达与宫颈癌临床病理特征的关系

3　讨论

目前肿瘤药物治疗的靶点主要有细胞周期和细胞信号转导通路，因为对肿瘤细胞选择性不高，药物治疗存在不良反应，因此众多研究者致力于寻找新的肿瘤特异性分子作为肿瘤诊断和治疗的靶点，以糖生物学为基础的靶点研究正逐渐成为肿瘤研究热点。而Tn抗原是近年来备受瞩目的一种TACA，在多种上皮性恶性肿瘤中高表达，且在肿瘤的发生发展中起到了重要作用，但在各自相对应的正常组织中则很少或不表达。

3.1Tn抗原在不同宫颈组织中的表达情况本研究发现Tn抗原极少表达于正常宫颈鳞状上皮，与以往的研究结果一致［7-8］。Tn抗原在CIN及宫颈癌中阳性表达率均高于宫颈正常鳞状上皮组织，差异有统计学意义（P＜0.05），这与Carrilho等［9］的研究结果一致。Tn抗原在宫颈癌中的表达率达81.8％，其中在宫颈鳞癌中表达率为68.8％，而在宫颈腺癌中表达率高达94.1％。因此，Tn抗原可能作为宫颈癌的标志物。

3.2Tn抗原在宫颈癌中的表达情况本研究采用VVL来检测Tn抗原，VVL与Tn抗原具有高度特异结合能力，其已用于检测胰腺癌、乳腺癌、肺癌及前列腺癌等肿瘤细胞［10-11］。目前薄层液基细胞学检查（TCT）以及人乳头状瘤病毒（HPV）联合应用于宫颈癌早期诊断，其对宫颈鳞癌的早期诊出率高于宫颈腺癌，因TCT对宫颈腺癌的漏诊率很高［12］，而本研究发现Tn抗原在宫颈腺癌中阳性表达率高达94.1％，这提示Tn抗原可能作为宫颈腺癌的一种高效的肿瘤标志物，从而对目前筛查诊断宫颈腺癌有一定帮助。

3.3Tn抗原阳性表达与宫颈癌不同病理因素的关系在宫颈鳞癌中，Tn抗原的阳性表达与是否发生淋巴结转移有关，而其表达与宫颈鳞癌的组织学分级、肌层浸润深度以及淋巴脉管瘤栓无关，提示Tn抗原可能作为预测宫颈鳞癌是否发生淋巴结转移的一项标志物。然而，本研究发现在宫颈腺癌中，Tn抗原表达仅与肌层浸润深度有关，Tn抗原的表达是否与癌转移存在相关性仍存在争议［8，11，13-14］，还有待于进一步大样本的研究核实。

［1］何凤梅.鳞状细胞癌抗原在宫颈癌中的表达及其临床意义［J］.中国实验诊断学，2009，13（7）：965-966.

［2］童红莉，李娟，温新宇，等.肿瘤标志物联合检测在宫颈癌诊断中的应用价值［J］.标记免疫分析与临床，2011，18（3）：160-162.

［3］Konska G，Guerry M，Caldefie-Chezet F，et al.Study of the expression of Tn antigen in different types of human breast cancer cells using VVA-B4 lectin［J］.Oncol Rep，2006，15（2）：305-310.

［4］Remmers N，Anderson JM，Linde EM，et al.Aberrant expression of mucincoreproteinsando-linkedglycansassociatedwith progression of pancreatic cancer［J］.Clin Cancer Res，2013，19（8）：1981-1993.

［5］邸曼，陈必良，陈良凤，等.T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义 ［J］.中国生化药物杂志，2015，（1）：91-93.

［6］Terasawa K，Furumoto H，Kamada M，et al.Expression of Tn and sialyl-Tn antigens in the neoplastic transformation of uterine cervical epithelial cells［J］.Cancer Res，1996，56（9）：2229-2232.

［7］Cao Y，Stosiek P，Springer GF，et al.Thomsen-Friedenreich-related carbohydrate antigens in normal adult human tissues：a systematic and comparative study［J］.Histochem Cell Biol，1996，106（2）：197-207.

［8］RavnV，MandelU，SvenstrupB，etal.Simplemucin-type carbohydrates in normal and malignant human endometrium［J］.Int J Gynecol Pathol，1995，14（2）：158-166.

［9］CarrilhoC，CantelM，GouveiaP，etal.Simplemucin-type carbohydrate antigens（Tn，sialosyl-Tn，T and sialosyl-T）and gp 230 mucin-like glycoprotein are candidate markers for neoplastic transformation of the human cervix［J］.Virchows Arch，2000，437 （2）：173-179.

［10］Kulkarni KA，Sinha S，Katiyar S，et al.Structural basis for the specificity of basic winged bean lectin for the Tn-antigen：a crystallographic，thermodynamic and modelling study［J］.FEBS Lett，2005，579（30）：6775-6780.

［11］Kawaguchi T，Takazawa H，Imai S，et al.Expression of Vicia villosa agglutinin（VVA）-binding glycoprotein in primary breast cancer cells in relation to lymphatic metastasis：is atypical MUC1 bearing Tn antigen a receptor of VVA？［J］.Breast Cancer Res Treat，2006，98 （1）：31-43.

［12］张建新，张长淮，周艳秋，等.15393例宫颈液基细胞学与组织病理学的对照分析［J］.中华病理学杂志，2007，36（7）：485-488.

［13］Hamada S，Furumoto H，Kamada M，et al.High expression rate of Tn antigen in metastatic lesions of uterine cervical cancers［J］.Cancer Lett，1993，74（3）：167-173.

［14］Lin CY，Ho JY，Hsieh MT，et al.Reciprocal relationship of Tn/NF-κB and sTn as an indicator of the prognosis of oral squamous cell carcinoma［J］.Histopathology，2014，64（5）：713-721.

［本文编辑秦娟］

Expression and Clinical Significance of Tn Antigen in Cervical Carcinoma

WANG Dan-yang，LI Yang-yang，WANG Bin，XIANG Mei.Department of Obstetrics and Gynecology，The Second Hospital of Jilin University，Changchun 130041，China

XIANG Mei，E-mail：xiangmei@126.com

130041长春，吉林大学第二医院妇产科

向梅，E-mail：xiangmei@126.com

2016-01-11）