传代
- 胎鼠神经干细胞原代培养及传代条件优化
示：NSCs 在传代培养后的活性受培养基成分、生长因子浓度、消化时长和吹打力度等方面的影响，但传代的细胞密度和传代时神经球大小对NSCs 活性影响及其作用效果尚未完全阐明。本研究在原代培养NSCs 的基础上，探讨传代的细胞密度和神经球大小对神经干细胞活性的影响，为优化NSCs 的体外培养条件提供实验依据。1 材料与方法1.1 实验动物、主要试剂和仪器孕12~14 d SPF级SD 大鼠，无特定病原体动物，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产
吉林大学学报（医学版） 2023年6期2024-01-05
- 富集纤维素降解菌群过程中微生物群落多样性分析
用。本研究以连续传代的纤维素降解复合菌系为研究对象，利用16S rRNA 及ITS基因扩增子高通量测序方法，分析不同传代复合菌系降解纤维素过程中各微生物分类单元的群落组成及其相对丰度变化，探究复合菌系群落结构的动态变化规律。1 材料与方法1.1 材料接种物：取自四川省金堂县农村合作社新鲜屠宰的山羊瘤胃内溶物，4℃保存于无菌的血清瓶中。配制赫奇逊无机盐培养基(g·L-1)：KH2PO41.0，NaCl 0.1，MgSO4·7H2O 0.3，NaNO32.5，
中国沼气 2023年1期2023-03-27
- 狂犬病病毒aG株在人用狂犬病疫苗中应用的研究进展
毒，随后通过兔脑传代，驯化为一种固定毒：1~10代的潜伏期不稳定，波动在10～26 d；30代后的潜伏期稳定在6 d。将该毒株命名为“北京株”，适应31代后用于制备狂犬病疫苗，该株病毒毒力略强于法国、德国、意大利、波兰、印度等国家的毒株，具有免疫原性好、遗传稳定的特点，用其生产的狂犬病疫苗有效性良好［3］。20世纪60~70年代，研究者将狂犬病病毒北京株通过豚鼠脑传代与原代地鼠肾细胞交替传代的方法适应于原代地肾细胞培养，用于狂犬病疫苗生产。该毒株免疫原性好
中国生物制品学杂志 2022年3期2022-11-15
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒传代与免疫原性变化的关联研究
JX143经细胞传代的三个代次病毒（JXM105、JXM125和JXM135）为研究对象，通过3株传代毒株对其亲本毒株JX143免疫保护效力评价和全基因组序列分析，解析病毒体外传代与毒株免疫原性间的关联。本研究首先用4周龄仔猪的免疫接种试验和攻毒保护试验初步评价了3株传代毒株的安全性和免疫效力，为PRRSV传代致弱毒株的科学评价提供参考。随后在对这3个毒株进行全长基因组测序的基础上，结合动物试验结果，探讨了JX143毒株在细胞传代过程中获得的基因突变与病毒
中国动物传染病学报 2022年4期2022-09-23
- 嗜酸乳杆菌和双歧杆菌遗传性对其益生特性及货架期菌数的影响
]。这是因为连续传代和转管次数可导致基因重排或缺失，影响其益生特性[20-23]。本研究中菌株是经文献报道，具有优良益生特性[24]。通过评价益生性状遗传性及货架期存活率，筛选益生特性最佳菌株，旨在为益生菌产品产业化提供依据。1 材料与方法1.1 材料与试剂嗜酸乳杆菌Z-43，乳双歧杆菌Z-1，Z-36，Z-38，Z-39，长双歧杆菌Z-5，短双歧杆菌Z-47，由青岛根源生物技术集团公司食品菌株资源库提供；鼠李糖乳杆菌LGG购于新西兰恒天然公司。MRS肉汤
中国乳品工业 2022年4期2022-05-19
- 无血清全悬浮PK15细胞培养猪圆环病毒2型的研究
、低血清悬浮优化传代、无血清悬浮传代培养，累计传代23次后，该株细胞可在无血清全悬浮培养条件下，初始密度为0.5×106/mL时，经72 h密度可增殖到4.0×106/mL左右，形态良好，倍增时间稳定，且细胞活率达到95%以上，命名为PK15-S[5]。1.2.2 PK15-S细胞对PCV2敏感性实验 参考平面PK15细胞接毒工艺，将驯化后的PK15-S细胞按0.04 MOI接毒，接毒密度为0.5×106/mL，同时加入2% D-G(V/V)，48 h、7
中国兽药杂志 2022年1期2022-02-21
- 酵母在传代过程中生长性能、碳流向及抗氧化特性的研究
问题，需要不断地传代保藏，在传代保藏过程中会发生衰老，严重影响发酵产物的品质[5]。酵母的衰老主要分为两种：(1)随着酵母不断传代、分裂次数的增多，活力逐渐降低，称为复制性衰老；(2)单个酵母产生有限的子细胞的时序性衰老[6-7]。引起酵母细胞衰老的原因主要有：(1)酵母细胞端粒理论[8-9]，酵母细胞在每次分裂过程中细胞端粒缩短3～4 bp，直到细胞的平均端粒长度200 bp耗尽，酵母的DNA发生损伤造成衰老。(2)酵母内源性氧化胁迫[10]，酵母在代谢
河南工业大学学报（自然科学版） 2022年6期2022-02-15
- 骨髓间充质干细胞生物学特性的影响因素：供体年龄和体外扩增
研究表明，在早期传代中，hBMSC的细胞增殖率约为48 h。在第10 代（10 passages，P10）后，细胞的增殖效率稳步下降。至少在P10之前hBMSC 保留了其高水平的端粒酶活性和长端粒长度。hBMSCs 在P15 显示出扩大、扁平的细胞形态，此后他们停止进行细胞分裂，但仍保持存活。在P20， hBMSCs 经历了周期阻滞，端粒酶活性显著降低。大鼠的BMMSCs 成纤维细胞样形态维持了7 ～ 10 代。渐渐地，衰老细胞的增殖速度明显减缓，凋亡率增
实用器官移植电子杂志 2021年6期2021-11-30
- 塞尼卡病毒A在BHK-21细胞中培养条件探索
酶-EDTA消化传代（比例为1:3），随机将细胞分成2组，一组同步接种1% SVA；另一组待细胞生长约90%时，弃去营养液，异步接种1% SVA，加入MEM维持液（含2%新生牛血清）；设健康细胞作对照。接毒后细胞放37℃、5% CO2培养箱中培养。培养12 h后每3 h观察一次，18 h后每3 h、每组随机收获2瓶，直至30 h，收获后反复冻融2次，测定TCID50。2.2 不同细胞浓度培养同时收获对比试验 将长满致密单层的BHK-21细胞消化后，按1:2
福建畜牧兽医 2021年5期2021-10-03
- 猪圆环病毒2型培养工艺比较研究
毒+氨糖组：细胞传代接毒基本同C组，在培养至48 h弃营养液后，加入含3 mmol/L D-氨基葡萄糖、30 mL/L无猪圆环病毒污染的新生牛血清的细胞维持液继续培养36 h～48 h，冻融收获细胞及培养液。④带毒传代组：将扩大培养的细胞，加入0.2 g/L EDTA、0.5 g/L胰酶消化液，37℃作用5 min～8 min，消化分散均匀。用含80 mL/L无猪圆环病毒污染的新生牛血清的MEM细胞生长液制备成每毫升约2×105个细胞的细胞悬液。按细胞生长
动物医学进展 2021年4期2021-04-06
- 非洲猪瘟病毒细胞传代致弱株研究进展
可以在细胞上繁殖传代[1-3]。早期研究就已发现，分离强毒株在细胞上连续传代后再次接种猪不再出现典型的临床症状，而且这些猪可以经受住同源强毒株的攻击[3]。但后期的一些研究却发现，某些毒株在传代细胞系连续传代后虽然毒力减弱，却不能提供同源保护[4]。同时，不同ASFV在不同细胞上的适应性传代结果并不相同。面对上述进展，国内尚无专业材料进行论述，因此本文将对国际上ASFV细胞传代致弱毒株相关研究进行整理，分析其传代致弱规律，从而为我国ASFV细胞适应株研究及
中国动物检疫 2021年6期2021-03-28
- DMEM 和F- 12K 对肝癌细胞系HepG- 2 的影响
1.2.1 细胞传代待细胞生长至培养皿的80%-90%时进行传代。弃上清，用1mlPBS 清洗两次，弃PBS，加1ml 胰酶后放置在培养箱中37℃消化1min，镜下观察细胞形态变圆后弃胰酶，加2ml 培养液用移液枪冲刷并收集细胞。将上述的2ml 混有细胞的培养液向两个空皿中各加入1ml，再将培养液补足至7ml，轻微振荡后置于培养箱中培养。1.2.2 细胞换液弃上清，用1mlPBS 清洗两次，弃PBS，将培养液补足至7ml，轻微振荡后置于培养箱中培养。图11
科学技术创新 2021年7期2021-03-23
- 母系肥胖通过miR-27a-3p增加子代肝细胞癌的发病率
代脂肪肝病变发生传代性累积，但目前领域内尚不清楚母系肥胖是否会影响子代HCC的发生发展。因此，本研究设计有关实验旨在研究这其中的联系及其潜在机制。在实验团队前期建立的小鼠高脂饮食诱导的三代肥胖模型中，用二乙基亚硝胺诱发HCC，并进行转录组测序以确定子代中基因和microRNA的变化。利用细胞系和裸鼠模型评估了miR-27a-3p-Acsl1/Aldh2轴在HCC中的作用，并利用孕鼠及其后代研究了该调控轴对代间的影响。在高脂饮食刺激下，母系肥胖导致子代更易患
临床肝胆病杂志 2020年10期2020-12-13
- 两株自筛酵母衰退性对葡萄酒发酵原酒品质的影响
的，而是经过连续传代逐渐变化的[4]，除了连续传代以外，不适宜的培养和保藏条件也是加速菌种衰退的一个重要原因[5]。因此，菌种保藏的基本手段是采用低温、干燥、冷冻或隔氧等方法来中止菌种繁殖，降低代谢强度，使之处于休眠状态[6-7]。适合葡萄酒自筛酵母的保存方法有很多，如斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、液体甘油保藏法等[8-9]。工厂由于设备和技术等条件的限制，最常用的菌种保藏方法是斜面低温保藏法，此法的优点是操作简单，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是
酿酒科技 2020年9期2020-11-02
- 异育银鲫(Carassius auratus gibelio)脊髓组织 细胞系的建立及对CyHV-2 的敏感性*
胞系中进行连续的传代(马杰等， 2016)， 比如胖头鲤细胞(fathead minnow cells， FHM) (Junget al， 1995)、鲤鱼上皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprini， EPC)、草鱼卵巢细胞(grass carp ovary， CO)、草 鱼 肾 细 胞(grass carp kidney， CIK)均对CyHV-2 不敏感， 仅锦鲤鳍细胞(koi fin， KF-1)能产生细胞病变效应(CPE
海洋与湖沼 2020年5期2020-10-14
- 大鼠骨髓间充质干细胞分离方法的改良与比较*
的分离效率较低，传代时间较久。2019年9—11月，本研究对胰蛋白酶消化合并细胞刮刮取法的分离培养方法进行探索，改进了传统的分离方法，以期在较短的时间内获得更多数量的BMSCs，为BMSCs进一步研究和应用提供参考。1 材料与方法1.1 一般材料1.1.1 实验动物 清洁级雄性SD大鼠9只，体重(200±15)g，由昆明医科大学动物部提供；取材过程符合动物伦理学标准。1.1.2 主要试剂及仪器 胎牛血清(FBS)、培养基、磷酸盐缓冲液(PBS)、青链霉素、
广东医学 2020年14期2020-08-17
- 液体发酵高产纳豆激酶菌株的复合诱变选育
的突变株，经8次传代后5株菌液体发酵产NK活性分别达到了1 846.15、1 956.48、2 184.32、1 865.38和2 095.23U/mL，是复合诱变出发菌株的1.62、1.81、1.98、1.61、1.62倍，为液体发酵生产NK的工业化奠定了良好的基础.1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 菌种 本实验所用NK 生产菌株，为实验室保藏的菌株和市售豆豉、黄豆酱和豆腐乳中筛选的产NK菌株.1.1.2 主要试剂 牛纤维蛋白原、凝血酶和标准尿激
河南科学 2020年5期2020-07-04
- 复方金连菊制剂对PRRSV、TGEV 体外作用的研究
arc-145 传代细胞，PK-15 传代细胞，TGEV 均为广西壮族自治区兽医研究所病毒研究室提供。1.1.3 主要试剂DMEM培养基、1640培养基、小牛血清、胰蛋白酶（0.25%）、NaHCO3、双抗（青霉素80 万单位、链霉素80 单位）1.2 方法（1） PRRSV、TGEV 病毒毒力测定（TCID50）。按殷震[6]方法、冯晓巍[3]方法将Marc-145 传代细胞进行消化传代，细胞数调整至2×105个/ml，加到96 孔细胞培养板中，100u
中国畜禽种业 2020年6期2020-07-02
- PK15细胞的无血清全悬浮驯化研究
大、放大倍数大、传代方便等优势，但是对搅拌和气体的剪切力非常敏感，对反应器的结构有较高的要求。无血清培养是通过用已知的人源或者动物源的蛋白或生长因子、激素来代替动物血清的一种培养方式，可减少后期纯化工作的难度，提高产品质量[7]。本研究对一株贴壁的PK15进行了无血清的全悬浮驯化，以期为大规模培养猪圆环2型病毒提供理论依据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 细胞和毒株 PK15细胞(猪圆环病毒1型阴性、猪肺炎支原体阴性)由大北农动物医学研究中心保存。1
中国兽药杂志 2019年9期2019-10-14
- UL46基因移码突变对PRV毒力的影响
ro细胞上40℃传代培养120代后，获得了1株高度适应Vero细胞的毒株（JS-2012-F120株），该毒株病毒滴度明显提高，对猪和小鼠的毒力减弱[2]。测序结果显示，在传代过程中病毒基因组有多处基因缺失和突变[3]。gE是PRV主要的毒力基因，高温传代弱毒株（JS-2012-F120株）的gE至US2基因区域2307个碱基缺失被认为是PRV毒力减弱的主要因素[2]。另外，UL46基因在1796位有29个碱基插入导致基因移码突变，使3'端130个氨基酸突
中国动物传染病学报 2019年4期2019-09-06
- 人胰腺癌细胞系PANC-1细胞培养方法的改良
ANC-1细胞的传代1）准备器械和试剂，常规消毒；2）镜下观察细胞生长状态和汇合度，一般于汇合度80%左右进行传代；3）常规洗涤、胰酶消化细胞；4）利用消化的间隙，在新培养皿中加入培养液，作好标记；5）镜下观察细胞脱落和离散；6）将原培养皿内细胞悬液，平均分配于新培养皿中；震荡混匀后放37℃，5%CO2培养箱孵育。3.结果从2016年8月-2017年9月，本课题组共复苏PANC-1细胞11次，传代19次，见图。图 传统方法和改良方法对比图细胞传统复苏到传代
医药前沿 2019年11期2019-05-23
- 菌种超低温保存法与人工传代法的比较
[1-2]。人工传代法的操作虽简单，但费时、费工、效率低，且反复传代会增加菌种污染的机会。因而寻求一种简单易行、较长期有效的菌种保存方法一直是实验室研究的热点和所期望的目标。本文对超低温法（-80 ℃）与人工传代法保存菌种的效果，结合文献资料进行了比较观察，其中超低温法（-80 ℃）采用两种方法保存，菌种保存液法及瓷珠菌种保存管法，现将结果报告如下。1 材料与方法1.1 保存菌的菌种名录本研究共使用的15种菌种，分别购自广东省微生物研究所菌种保藏中心及美国
现代食品 2018年21期2019-01-14
- 有关拟南芥高温记忆的表观遗传机制研究取得重要进展
维持植物对高温的传代记忆的新机制。通过生物化学、分子生物学和遗传学相结合的方法，该研究鉴定出一个F-box泛素连接酶SGIP1（SGS3-INTERACTING PROTEIN1） 参与降解SGS3蛋白。高温对SGIP1的上调表达同样具有传代记忆。对传代记忆机制的深入研究结果表明，高温能激活热激转录因子HEAT SHOCK TRANSCRIPTION FACTOR A2 (HSFA2)。HSFA2一方面能直接结合SGIP1启动子上的热激转录元件从而激活SG
蔬菜 2019年3期2019-01-04
- 牦牛病毒性腹泻病诊断与病毒分离鉴定
验室保存的牦牛肾传代细胞，牛病毒性腹泻病毒阳性血清、阴性血清、牛病毒性腹泻间接免疫荧光检测试剂盒3种物品均购自于中国兽医药品监察所。1.2 临床诊断结合大通县某养殖场的实际发病情况，对该养殖场发病牛的临床症状进行认真仔细地观察，结合养殖场该病的流行情况和患病牛的临床表现，对该病做出初步诊断。1.3 试验方法1.3.1 样品采集采集养殖场某患病牛的鼻腔粘液和粪便，作为临床实验室诊断病料，低温保存带回实验室。1.3.2 病毒分离培养与细胞病变观察将从患病养殖场
畜牧兽医科学 2018年13期2018-11-19
- 两株lager啤酒酵母在传代及自溶过程中生理性能差异的比较
种操作过程被称为传代(serial re-pitching)[1, 3]。在传代过程中，酵母细胞在发酵结束时被收集并用于新一代的接种，而酵母细胞用于连续发酵的次数，叫做“代数”。啤酒酿造工业中，活跃的、年轻的和生理稳定的酵母细胞是生产高质量啤酒必不可少的，一些啤酒厂也尽量避免出现传代次数过多的问题[4]。啤酒酵母根据发酵结束后酵母细胞在发酵液中活动的状态可分为两类，分别为上面啤酒酵母和下面啤酒酵母。上面啤酒酵母(Saccharomycescerevisia
食品与发酵工业 2018年10期2018-11-14
- 非实验期Jurkat细胞培养方法探讨
是每隔1天行换液传代[1]或者冻存。最近，细胞自噬引起关注。自噬是一种保守的细胞防御机制，在一定条件下细胞自噬能够维持细胞的存活[2]。引起细胞自噬的因素很多，包括血清、葡萄糖、温度和二氧化碳等。本文将探讨室温中维持Jurkat细胞非实验期的培养，并从细胞自噬方面寻求依据。1 材料与方法1.1材料 白血病T淋巴细胞株Jurkat细胞为培养细胞，小牛血清购于杭州四季青生物工程材料有限公司；RPMI1640培养基 （含青霉素100U/mL，链霉素100μg/m
浙江实用医学 2017年6期2018-01-30
- 中国乙型脑炎病毒株的毒力变异和减毒活疫苗的研究
同鼠龄以不同途径传代的毒力变异研究，结果显示在鼠脑传代过程中，皮下毒力随着传代次数的递增而下降，降低的速度又与传代用小鼠的鼠龄密切关系。即鼠龄越大，脑内传代后皮下毒力下降越快，下降幅度越大。如将A2株在7日龄、3周、5周和1年龄小鼠的脑内传代时，经7日乳鼠脑内传代的病毒到145代时，才可见毒力明显下降，在3周小鼠脑内传代的病毒，到113代后，皮下毒力已下降到4.5lg LD50，在5周鼠脑内传代时到113代后皮下毒力已下降至1.0～1.3lg LD50，而
中华实验和临床病毒学杂志 2018年5期2018-01-17
- IBDV超强毒株NJ09株在DF—1细胞上的增殖工艺
105个/mL）传代培养，细胞生长36～48 h后按体积分数0.1%～0.2%接种IBDV NJ09株毒种，接毒后 36～48 h收毒；同时筛选出适宜IBDV NJ09株病毒增殖的MD611培养基及小牛血清，既可以满足高滴度抗原增殖的生长需要，又降低了疫苗生产成本，形成了适用于规模化生产的抗原接种、收获、处理工艺技术指标，按上述工艺所增殖的IBDV NJ09株抗原病毒含量稳定在108.0 TCID50/mL以上，可满足含IBDV组分的系列灭活疫苗生产需要，
江苏农业科学 2017年17期2017-11-15
- 猪瘟疫苗（传代细胞源）生产工艺研究
69）猪瘟疫苗（传代细胞源）生产工艺研究礼 颖，王春雪（哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）猪瘟是一种传染性疾病，是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一。由猪瘟病毒引起，因其流行广、发病率及死亡率高，猪瘟的防控工作也变得越来越艰巨。接种疫苗是控制猪瘟的主要途径，试验通过对猪瘟传代细胞源的工艺优化研究，以获得较好的生产工艺技术参数，从而确保提高产品效价和稳定性。ST细胞；消化；接毒，效价猪瘟由猪瘟病毒（CSFV）引起，流行广，发病率及死亡率较高，
饲料博览 2017年7期2017-08-29
- 传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响
0515基础研究传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响王济舟，曾 宇，宋 烨，漆松涛南方医科大学南方医院，广东 广州 510515目的探索不同传代次数对人胶质瘤U87细胞系生物学特性的影响及其分子机制。方法以两种不同传代次数的U87（I）、U87（II）为研究对象，使用MTT细胞增殖实验、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验分别检测U87细胞的增殖、迁移和侵袭能力；使用Western Blot技术检测U87（Ⅰ）及U87（Ⅱ）的
分子影像学杂志 2017年2期2017-07-03
- 猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫产生期和免疫持续期试验
3)猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫产生期和免疫持续期试验任向阳1，2, 吴文福1, 岑小清1，游启有1, 刘秋燕1，赖月辉1，黄秋雪1(1.广东永顺生物制药股份有限公司，广东广州511356 ； 2.广州出入境检验检疫局，广东广州510623)将三批猪瘟活疫苗(传代细胞源)以单剂量分别接种仔猪进行免疫产生期试验。在免疫同时以及免后1、2、3、4、5日连同对照组分别攻击猪瘟强毒，攻毒后观察16天，结果表明，猪瘟活疫苗(传代细胞源)免后4日即可产生坚强的免疫保护
中国兽医杂志 2017年4期2017-06-29
- 防治食用菌种老化“六步”
2.严格控制菌种传代次数，减少机械损伤，保证菌种活力。3.在适当的温度保存菌种：低温型菌种如蘑菇、香菇等，在4℃有利于保存菌丝体活力；高温型菌种如草菇，在16℃有利于保存菌丝体活力。4.避免在单一培养基中多次传代；菌种不宜过长时间使用，超龄菌种会出现老化，而老化与退化是有机相连的，生活力弱的菌种容易出现退化。5.菌种要定期进行复壮，在适温、合适酸碱度、充足氧量、无杂菌培养等条件下进行。6.每年进行孢子分离，以有性繁殖来发现优良菌株，以组织分离来巩固优良菌株
农家之友 2017年3期2017-03-27
- 微生物实验室菌种复苏传代保存流程分析
实验室菌种复苏、传代、保存体系是一件非常重要的事情，从而促进我国微生物实验精确度提升，增强相关工程管理质量的规范程度，为我国医药行业发展及生产质量提高创造良好的条件。关键词：菌种复苏；传代；保存微生物实验是我国建筑医药研发及生产的重要环节，是确保我国医药研发行业发展的关键基础。根据药典中的标准，微生物实验室对于新引进的培养基需要通过灵敏度测试后才能投入使用；另外，在对无菌实验成果进行检查时需要使用金黄色葡萄球菌作为对比参照，而在对日常灌装环境质量检测时需要
科学与财富 2016年32期2017-03-04
- 猪蓝耳病活疫苗生产工艺探索
细胞扩大培养时的传代比例、培养液血清浓度、毒种繁殖时的接毒量、培养液体积、病毒原液收获时间、半成品原液保存温度及保存时间等几方面参数对原液的病毒效价的影响，展开对比试验，最终确定最佳参数，为高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（HuN4-F112株）的大批量生产提供参考，不但要保障疫苗产品的质量，更要大大降低疫苗的生产成本和生产人员的劳动强度。一、试验方案（一）确定Marc-145细胞传代比率试验。将长满单层的Marc-145细胞弃去营养液，用分散液分散后按1
兽医导刊 2016年21期2016-11-24
- AKT-mTOR信号通路在大鼠椎间盘软骨终板细胞自然退变中的意义
胞，建立体外自然传代退变模型。随机分为空白对照组(自然传代第2代细胞)，自然退变组(自然传代第5代细胞)、AKT-mTOR信号通路抑制组(含LY294002抑制剂培养基传代至第5代)，AKT-mTOR信号通路激动组(含IGF-1激动剂培养基传代至第5代)。倒置显微镜下观察各组细胞形态；甲苯胺蓝染色检测细胞蛋白聚糖变化；RT-PCR检测细胞中Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX9以及AKT-mTOR信号通路中关键基因mTOR的表达情况；Western印迹检测AKT、p
中国老年学杂志 2016年15期2016-10-26
- 猪瘟传代细胞活疫苗、口蹄疫和高致病性猪蓝耳病联合免疫效果试验研究
兽医科学院）猪瘟传代细胞活疫苗、口蹄疫和高致病性猪蓝耳病联合免疫效果试验研究周建国1，张应国1，杨余山1，段博芳1，李志明2，夏九仙2，杨品3，元正菊4（1.云南省动物疫病预防控制中心，云南昆明 650201；2昆明市西山区动物疫病预防控制中心；3.昆明市富民县动物疫病预防控制中心；4.云南省畜牧兽医科学院）为评估猪瘟传代细胞活疫苗在猪瘟、高致病性猪蓝耳病和口蹄疫三种疫苗同步两点免疫新技术（即“321”免疫新技术）应用中的免疫效果，特进行本试验。1 材料与
中兽医学杂志 2016年4期2016-09-20
- 针对代次较多的3T3-L1细胞诱导分化法的改良
; 诱导分化; 传代次数小鼠前脂肪细胞3T3-L1在特定的诱导条件下，可以分化为成熟的脂肪细胞，因此，3T3-L1常被作为研究与脂肪相关疾病(肥胖、糖尿病等)的模型细胞，而诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞是开展上述研究的前提。本实验室的3T3-L1已被传代10次左右，用经典方法诱导时也遇到了细胞卷边和收缩严重的问题。结合上述报道的内容，我们适当改良了经典诱导方法，该方法适用于多次传代的3T3-L1的诱导。1 材料与方法1.1材料小鼠前脂肪细胞3T3-
实验科学与技术 2016年4期2016-09-18
- 改良组织块法培养C57BL/6小鼠胰腺星状细胞
原代PSCs，并传代。采用油红O染色观察细胞内脂滴变化，采用细胞免疫法及蛋白质印迹法检测细胞α-SMA、Desmin表达。结果贴壁4 d的原代PSCs多呈椭圆形或星形，胞质内大量脂滴，表达α-SMA及Desmin蛋白的细胞少；传代后细胞变大、伪足丰富，脂滴减少或消失，原代、传代PSCs的α-SMA蛋白相对表达量分别为0.653±0.071、2.290±0.055，传代细胞的表达显著高于原代细胞(P组织培养技术；胰腺星形细胞；细胞分离；体外研究胰腺的进行性纤
中华胰腺病杂志 2016年1期2016-09-08
- 改良Frey氏液体培养基质控菌株菌种代次与生长曲线研究
质控；菌种代次；传代支原体污染是生物制品常见的污染源，给科研、疫苗生产及生物制品产业带来许多麻烦，《美国药典》、《欧洲药典》及《中国兽药典》二〇一〇年版三部中均有使用培养法进行生物制品支原体检查的专题论述[1-3]，《中国兽药典》二〇一〇年版三部规定滑液支原体、猪鼻支原体分别为支原体检验用培养基支原体改良Frey氏培养基、支原体培养基质控菌株[3]。通过测定不同培养时段的CCU，绘制出的MS生长曲线表明：其迟缓期为培养后6 h内，对数期为6～36 h，稳定
中国兽药杂志 2016年1期2016-02-07
- 大肠杆菌对环丙沙星和恩诺沙星的敏感性恢复
复的差异以及细菌传代、营养因素和耐药菌比例对敏感性恢复的影响。1 材料与方法1.1 菌株、药品和培养基菌株：耐药大肠杆菌D600、野生型大肠杆菌D549（敏感菌株），由贵州大学动物科学学院基础兽医实验室提供；质控菌株为大肠埃希氏菌标准菌株ATCC25922，购自中国兽药监察所。药品：环丙沙星、恩诺沙星标准品，购于上海盛思生化科技有限公司。培养基：LB肉汤、米勒－海顿肉汤（MHB），购于上海博微生物科技有限公司。1.2 药物的最小抑菌浓度（MIC）测定参照美
贵州农业科学 2015年6期2015-07-01
- 小鼠和奶牛乳腺上皮细胞的分离及培养特性比较
种细胞的体外培养传代和冻存复苏试验，对比了MMECs和BMECs的分离、培养方法、生长特性、细胞传代和复苏性状，为选择及建立合适的MMECs和BMECs体外模型，以及开展乳腺相关功能研究提供参考。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物 妊娠后期SPF 昆明鼠购自湖北省疾病控制中心，泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺组织采自湖北省某兽医站。1.1.2 主要试剂及耗材 胶原酶（Collagenase）Ⅰ和Ⅱ为Solarbio公司产品；2.5g／L 胰蛋白酶－0.2
动物医学进展 2015年12期2015-06-11
- 支原体培养基质控菌株菌种代次与生长曲线研究
了不同代次与不同传代方式猪鼻支原体生长情况。结果显示：3%与10%浓度传代，0～48 h内，活菌浓度持续上升，菌液pH值持续下降，3%浓度传代的支原体生长较均匀，更利于菌种生长；1～5代支原体活菌浓度无显著差异；通过0.3 mL菌液加9.7 mL培养基传代，20组菌液平均浓度为(24.4±5.7)×108CFU/mL，通过0.9 mL菌液加29.1 mL培养基传代，菌液平均浓度为(7.2±2.1)×108CFU/mL，两种浓度差异极显著，前种传代方式更有利
中国兽药杂志 2015年8期2015-03-13
- 鸡传染性法氏囊病病毒弱毒株在鸡体连续传代后毒力增强的分子机理研究
SPF鸡体内连续传代，发现弱毒株在鸡体内传代后囊体比大幅度下降，表明IBDV弱毒株在SPF鸡体内连续传代后毒力返强。为进一步研究弱毒株及其鸡体传代毒毒力变化与基因的关系，本试验测定了基础弱毒株及其鸡体传代毒的基因组编码区序列，并对其进行比较分析，以期从分子水平上为该病毒毒力相关位点的研究提供依据。1 材料与方法1.1 毒株、菌株和载体 IBDV弱毒株A、弱毒株B由本实验室保存；大肠杆菌JM109感受态细胞、pGEM－T载体均购于promega公司。21日龄
中国兽药杂志 2014年5期2014-05-29
- 1型鸭甲肝病毒LY0801株VP1基因在鸭胚传代中的变异规律研究
VP1基因在鸭胚传代中的变异规律研究马明杰，郭翠平，焦玉祥，吕佳泓，孙 振，张瑞华，陈君豪，谢之景，姜世金（山东农业大学动物医学院 山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室，泰安 271018）为了解1型鸭甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1）VP1基因在鸭胚传代中的变异规律，本研究将LY0801株DHAV-1在鸭胚体内传代至30代，分别对1～5、10、15、20、25、30代病毒进行VP1基因的克隆测序。各代次病毒分别以10
中国动物传染病学报 2014年5期2014-04-13
- 金黄色葡萄菌球菌毒力基因在传代过程中的稳定性
菌球菌毒力基因在传代过程中的稳定性孙美英，何剑斌⋆（沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁 沈阳 110866）为了解分离自奶牛乳房炎的金黄黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）毒力基因在传代过程中的稳定性，对传代前后金黄色葡萄球菌的毒力和毒力基因进行测定和检测。本研究采用急性毒性试验的方法测定8株金黄色葡萄球菌原代、第5代、第10代、第15代、第20代及第25代的菌株对小鼠的半数致死量，通过聚合酶链式反应（PCR）检测原代、第5代、第10代、1
现代畜牧兽医 2014年2期2014-03-07
- HP-PRRSV原始株在抗体压下传代突变株抗原性及致病力变化研究
原始株在抗体压下传代突变株抗原性及致病力变化研究范书金 （山东省聊城市动物医院 252000） 肖延光 赵爱民 魏雅茹 王素红（山东省聊城市畜牧站）为了比较高致病性蓝耳病山东分离株SD0612原始株及其在抗体选择压下突变株在回归猪体后的抗体动态变化，试验中，将15头健康猪分为5组，分别为SD0612原毒感染组、有抗体条件下第1次传40代突变株F40感染组及有抗体条件下再次传40代突变株e40感染组、无抗体条件下再次传40代突变株a40感染组及阴性对照组，分
山东畜牧兽医 2013年1期2013-11-26
- 流式细胞仪在检测系膜细胞衰老特征中的应用
约7 d后第1次传代，传代的细胞24 h全部贴壁，生长迅速，形态为梭形或不规则星形，3～4 d已汇合成片，纯度极高，经鉴定结蛋白(Desmin)阳性、抗Ⅷ因子抗体阴性，传代，用于实验的为第3、5、10 代。1.2.2 衰老相关β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)染色 种于六孔板中的各组细胞，待细胞生长至80%汇合，用PBS液清洗3次，于室温固定细胞5 min，PBS液清洗3次后，加上新配制的含1 mg/ml X-gal的 SA-β-gal染液，置 37℃
中国老年学杂志 2013年19期2013-09-12
- 羊睾丸原代细胞传代试验
）羊睾丸原代细胞传代试验张玉红，何玉仙，井莲娜，王玉红（新疆天康畜牧生物技术股份有限公司，新疆 乌鲁木齐830011）生产山羊痘活疫苗时，羊睾丸采集工作量大，易污染，费时费事，是否有办法减少人员外出采集羊睾丸次数，值得摸索，本实验将长成单层的羊睾丸细胞进行传代，长成致密单层后进行接毒，收获毒液，并对毒液及疫苗成品进行病毒含量测定，结果表明，羊睾丸细胞完全可以传一代，细胞形态良好，毒液、疫苗成品毒价均达到规程要求，羊睾丸原代细胞传代可以大大提高睾丸组织利用率
草食家畜 2013年3期2013-06-05
- 猪瘟活疫苗（传代细胞源）猪瘟病的克星
出了猪瘟活疫苗（传代细胞源），即一般所称的“猪瘟传代细胞苗”，简称猪瘟ST苗。猪瘟传代细胞苗是一种优质高效的新型疫苗，它具有高度不易污染外源病毒而特别安全、高效、无应激、价格合理等特点。研究人员预测猪瘟传代苗将在未来猪瘟的预防控制方面起重要作用。近年来，我国不少地方猪瘟疫情呈现上升的趋势。猪群猪瘟带毒或隐性感染十分普遍，猪瘟流行呈现典型猪瘟和非典型猪瘟共存、混合感染或继发感染频繁出现的特点，母猪繁殖障碍和新生仔猪先天性感染等疫病严重威胁我国的养猪生产安全。
四川畜牧兽医 2013年9期2013-04-08
- 脑瘫患者骨髓间充质干细胞体外培养特性分析
。1.3 原代及传代细胞生长形态特征及细胞增长速率计算 原代细胞一般在分离后6～9 d传代1次，P1以后于细胞生长达到覆盖培养皿的60% ～80%后予1∶2或1∶3传代。从第2代以后，每次传代时行hMSCs鉴定:弃去上清，用PBS清洗2次，滴加0.05%的Trypsin-EDTA胰酶消化，显微镜下观察细胞触角收缩，细胞变成圆形后，添加培养基终止消化，制成(1～3)×106/mL的细胞悬液分装于不同培养皿中，3～4 d根据培养基颜色换液。流式细胞仪检测示CD
山东医药 2012年23期2012-08-05
- 保藏过程中乳酸菌发酵菌种的选择
菌种在保藏期间的传代实验，通过对实验数据的分析比较可得出，在没有特殊要求的情况下，乳酸菌菌种的保藏最好是使用保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的混合菌种，这样可以大大降低乳酸菌菌种在保藏期内的特性变化。保加利亚乳杆菌，嗜热链球菌，传代培养导致菌种活性退化的原因是多方面的，而且活性退化是绝对的，不可避免的。为了保持菌种优良性状的稳定性，应尽量减少或降低退化速度[1]，但是在实际的生产过程中，菌种的传代是不可避免的。Tamine、马钢等认为嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌单
食品工业科技 2011年10期2011-10-25
- RT-SHIV感染中国恒河猴及体内传代
中国恒河猴及体内传代姚 南1，王 卫1，丛 喆1，陈 霆1，金 光1，陶 真1，陈志伟2，魏 强1(1.中国医学科学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021;2.香港大学李嘉诚医学院艾滋病研究所，香港 999077)目的 了解RT-SHIV感染中国恒河猴的感染特点，研究 RT-SHIV在中国恒河猴中传代特点;建立RT-SHIV中国恒河猴动物模型，为评价HIV-1药物有效性提供动物
中国比较医学杂志 2011年4期2011-10-19
- SLE患者骨髓间充质干细胞生物学特性的研究
0%融合时，则可传代。用0.5%胰酶/乙二胺四乙酸(EDTA)(Gibco，美国)消化贴壁细胞，收集细胞并悬浮于完全培养液中，按104/cm2的密度接种于新的培养瓶中，置37℃、5%CO2饱和湿度细胞培养箱中培养，每3～4天更换1次培养液，约1周待细胞生长密度达90%左右时，进行再次传代。1.3 MTT法检测MSC的生长情况 MTT比色法检测SLE患者第2代MSC的生长情况，作传代细胞培养的生长曲线分析。1.4 流式细胞术检测MSC表面分子的表达 细胞培养
中国实用医药 2011年29期2011-08-13
- 猪瘟活疫苗的田间免疫效果试验
淋组织疫苗和ST传代细胞苗。牛睾丸细胞苗由于使用原代细胞培养，批间差异较大；病毒培养液中病毒含量不高；再加上牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的污染，对疫苗的稳定性和纯净性影响极大。兔脾淋组织疫苗是利用兔子组织来制作疫苗，由于兔的饲养量有限和兔对猪瘟病毒的敏感性也在下降，这些对兔脾淋组织疫苗的质量和稳定性都有较大的影响。ST传代细胞疫苗，采用国际认证的同源传代ST细胞培养，批间差异极小，稳定性好，病毒培养液中病毒含量高，而且避免了其他病毒污染的威胁，相对目前其他
中国猪业 2010年11期2010-09-12
- 人脂肪组织来源干细胞生物学特性研究
积比1∶1）消化传代.1.2 细胞形态学观察使用倒置显微镜（IX70－131，OLYMPUS）观察细胞生长，并对传代贴壁生长在培养瓶中的脂肪干细胞的生长、纯化情况及增殖进行连续观察、摄像.1.3 细胞增殖动力学分析将第4代ADSC以不同密度6.25×104、1.25×105、2.50×105、5.00×105、1.00×106和2.00×106cells/m L种于96孔板内，获得细胞密度与光密度值的标准曲线.以5.00×103cells/m L的密度接种
大连理工大学学报 2010年5期2010-06-05
- 山羊原始生殖细胞分离与培养的影响因素
GCs进行培养和传代，从而得到ESCs，将其在不同的条件下培养，初步分析了各种不同条件对培养效果的影响。1 材料与方法1.1 材料试剂：高糖DMEM、非必需氨基酸（non-essential amino acid）：Gibco 公司；LIF、SCF：Sigam 公司；胎牛血清（FBS）：杭州四季青公司；L-谷氨酰胺（L-glutamine）、胰蛋白酶（trypsinase）、牛血清白蛋白（BSA）、胶原酶（collagenase）：上海生工生物工程有限公司
中国草食动物科学 2010年5期2010-06-04