浅谈药品微生物检验用菌种保藏方法

韩映晨 崔铉 安贤兰 高杰

浅谈药品微生物检验用菌种保藏方法

韩映晨 崔铉 安贤兰 高杰

微生物检验用菌种具有变异快的特点，保藏的基本是降低微生物的活性，对不同菌种的保藏方法进行研究。随着操作难度和技术难度的提升，菌种的保存期限也在不断的延长。本文对微生物检验菌种保藏方法的保藏原理以及不同方法的优劣及其效果进行探究和分析。根据不同菌种的具体特征，选择恰当的保藏方法，以确保保藏的效果，实现保藏的目的。选恰当的保藏方法进行保藏，充分保证菌种的活性以及纯度，发挥菌种在微生物检验实验中的价值，提高研究的准确性。

药品微生物；检验用菌种；保藏方法

微生物检验用菌种作为一种辅助检验菌种，其对于检验药物的原材料、辅助材料以及生产过程质量具有重要的价值。菌种的保藏是研究过程中的一项重要的工作，研究和选择良好的保藏方法一直以来是一项重要的工作[1]。为了保证菌种在检验中的应用效果，保持菌种的活性、纯度，控制菌种的变异具有重要的作用和价值[2]。

1 菌种保藏的目的和原理

菌种保藏的主要目的就是菌种能够在保持原有活力和形状的基础上，更好完成微生物检验的作用。从这个目的出发，对菌种进行保藏的最终目标就是降低菌种的死亡、变异、污染，保持菌种的活性[3]。菌种保藏的主要原理就是选取优良的菌种，将其代谢水平降低到最低的活跃状态或是保持在一种相对静止的状态。这样能够保证菌种不会发生变异，保持相应的活性。

菌种保藏方法的选用除了上述的保证菌种原有的优良性状不变的考量因素，还应考虑到保藏方法本身的简便和经济，主要是操作成本、保存条件需求的苛刻度以及生产推广使用的可行性[4]。

2 几种菌种保藏方法的介绍

不同的菌种具有不同的遗传特性，这导致不同菌种的保存方法也存在差异。良好的保藏方法不仅应该确保将菌种的活性保持在最佳的状态，同时还应该保证方法的操作简单，流程简化，避免复杂的流程带来污染等情况的发生。下面对几种菌种保藏方法进行简要介绍。

2.1 斜面低温保藏法

该种方法是一种比较常用的保藏法，其主要从操作就是将菌种培养到斜面培养基中，等到菌种覆盖整个斜面之后，将其放到温度为4℃的冰箱中保藏[5]。一定时间之后对菌种按照相同的方法进行转培养，通过这种不断进行转培养和保藏的方法进行菌种的保藏。这种方法的优势就是适用于多种菌种的短期保藏，具有操作简单、设备要求低、菌种存活率高的特点。但是这种方法的保存期间只有1～6个月，不适合需要长期保藏的菌种，温度控制在4℃，菌种通常还具有一定的代谢水平，会降低菌种的活性。同时，对菌种进行反复多次的培养，容易导致菌种发生变异，诱发感染等[6]。

2.2 石蜡油封藏法

这种方法主要是将培养成熟的菌种斜面，采用已经进行无菌处理并且采用蒸发方式去掉水分的石蜡，将斜面封起来[7]。保证石蜡层的厚度高出培养斜面顶端大约1 cm，确保培养的菌种与空气完全的隔绝。封存完毕之后，使用硅胶或者是固体石蜡，将口部封住，将其垂直摆放在温度为4℃的冰箱中。这种方法的优点是同时考虑了低温和阻断氧气，从两个方面降低了培养菌种的活性，能够延长菌种的保存时间。适合保存年限为1～2年的菌种。

2.3 定期移植法

定期移植法，顾名思义是通过不断地传代培养来实现保藏的目的，而培养方法包括斜面培养、穿刺培养、液体培养（主要针对厌氧菌）等，根据不同的菌种的生存特性选择不同的培养方法，因此该种保藏方法具有普遍的适用性。将菌种接种于适宜的环境中进行培养，一般选择最适条件培养，避免环境因素的改变诱发菌种遗传物质的改变导致性状改变，待生长充分后于4～6℃进行间隔一定时间的保存，再进行传代培养，保藏时间根据不同菌种或微生物不同而不同。

此类保藏方法操作简便，便于提取，但需要经常移种培养，且培养过程中微生物和菌种难免与外部环境接触因此无法排除变异的可能，而如果需要长期保藏，该保藏方法的人力成本较高，因此如果仅仅出于实验需要或其他特殊需求，短期内的保藏可以采取此方法。

3 小结

本文对几种菌种保存方法进行了阐述，其中操作最为简单和常用的方法为斜面低温保藏法，保存难度和技术要求比较高的是冷冻真空干燥保藏方法。随着操作难度和技术难度的提升，菌种的保存期限也在不断的延长[8]。同时，每种方法都存在自身的优点和不足，在时间的应用过程中，应该针对不同的菌种保藏目的，选取恰当的方法。

已有的研究成果资料显示，不同的菌种具有不同特性，在实际的保藏过程中，应该在充分分析菌种特点的基础上，选取恰当的方法。比如，对于枯草芽孢杆菌而言，如果传代培养次数过多，就会使它们变异成光滑型。这种类型会影响杆菌的抗生效果，不能够满足实验的要求；对于真菌而言，由于其遗传的稳定性，变异难度大，在保藏的过程中不用考虑特别的要求，没有必要进行经常的传代，可以采用中长期的方法进行保存。

综上，在实际的保藏过程中应该充分的考虑菌种自身的特点、特性以及保存的目的，实验室的保藏设备条件等。选恰当的保藏方法进行保藏，充分保证菌种的活性以及纯度，发挥菌种在微生物检验实验中的价值，提高研究的准确性和可靠性。

[1] 穆婷，封艳艳，宋珉，等． 药品微生物检验用菌种保藏方法简论[J]． 母婴世界，2015，3（6）：361-362．

[2] 赵婷，何丽英． 食品微生物检验质量的提升方式[J]． 现代食品，2016，2（10）：65-66．

[3] 刘文丽，程池，姚粟，等． 韩国食品用微生物菌种管理现状[J]．食品与发酵工业，2015，46（11）：237-242．

[4] 刘春兰，卢洪生． 药物生产或检验用菌种培养中微生物生长繁殖的影响及控制[J]．北方药学，2016，13（3）：149，184．

[5] 陈进林，梅承芳，高亮，等． 标准化测试中不同食物浓度对大型溞生长和繁殖的影响[J]． 生态科学，2015，34（6）：42-47．

[6] 宋文光，杨建勇，牛晓霞，等． 标准菌种在微生物检查法中的应用 [J]． 机电信息，2017，17（8）：6-10．

[7] 王一昊． 微生物实验室标准菌种的管理[J]． 医药卫生（文摘版），2016，12（6）：124．

[8] 于丽萍，王玉霞，甄涛，等． 黑龙江省微生物菌种保藏中心的现状及展望[J]．黑龙江科学，2015，6（13）：17-19．

Discussion on Methods of Bacteria Preservation for Microbiological Examination of Drugs

HAN Yingchen CUI Xuan AN Xianlan GAO Jie Yanbian Institute for Food and Drug Detection, Yanbian Jilin 133000, China

Microbial strains used for microbiological testing have the characteristics of rapid variation, and the preservation is basically to reduce microbial activity and study the preservation methods of different strains. With the difficulty of operation and the increase of technical difficulty, the storage period of bacteria is extended constantly. In this paper, the principle of preservation of microorganisms, the advantages and disadvantages of different methods and their effects were investigated and analyzed. According to the specif i c characteristics of different strains,select the appropriate preservation methods to ensure the preservation effect and achieve the purpose of preservation. Select appropriate preservation methods for preservation, fully guarantee the activity and purity of bacteria,bring into play the value of bacteria in microbiological test, and improve theaccuracy of research.

pharmaceutical microorganism; test bacteria; preservation method

R97

A

1674-9316（2017）20-0104-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．20．054

吉林省延边州食品药品检验所，吉林 延边 133000

崔铉