南京地区老年冠状动脉疾病病人ApoE基因多态性与SYNTAX评分的相关性研究

杨杨 周滢 田芸凡 史倞

冠状动脉疾病(coronary artery disease, CAD)可导致冠状动脉粥样硬化性心脏病，是一种由环境和遗传因素共同作用导致的心血管疾病。全基因组关联研究目前发现了约60个CAD的遗传易感性位点[1]，其中载脂蛋白E (apolipoprotein E, ApoE) 基因多态性因引起血脂代谢异常而与CAD的发生发展显著相关。SYNTAX评分体系是一种新型的按照冠状动脉解剖特点进行危险分层的积分系统，可以客观反映冠状动脉病变的严重程度。本研究将探讨南京地区老年人群ApoE基因多态性与冠状动脉病变复杂程度SYNTAX评分的相关性，以及ApoE是否可以作为预测冠状动脉病变复杂程度的基因学指标。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集 2017年8～9月江苏省人民医院心脏科连续收治的就诊户口所在地为南京的>60岁老年CAD病人109例，进行冠脉造影(CAG)检查。其中男68例，女41例；年龄60～94岁，平均(70.52±7.58)岁。按基因型分为3组，ApoE2组22例，平均年龄(68.09±6.89)岁，男12例，女10例；ApoE3组71例，平均年龄(71.24±7.82)岁，男46例，女25例；ApoE4组16例，平均年龄(70.69±7.12)岁，男10例，女6例。纳入标准：通过临床表现及实验室检查等考虑有行CAG的病人；排除标准：存在先天性心脏病、心肌病、心脏瓣膜病、心源性休克、恶性心律失常、多脏器功能不全、合并感染性疾病、消化道出血、哮喘、拒绝CAG者。

1.2 研究方法

1.2.1 一般资料收集：记录病人的性别、年龄、高血压病史、糖尿病病史、高血脂病史，脂蛋白(a)[Lp(a)]、TC、TG、LDL-C、HDL-C、肌酐(Cr)等临床指标。

1.2.2 CAG检查：该手术由经验丰富的心内科医师完成，采用GE大型数字减影血管造影机进行冠状动脉多体位投照，结果由2名冠脉方面的介入专家判读,结果不一致时由第3名医师分析确定。左主干管腔直径狭窄≥30%，左前降支、左回旋支、右冠状动脉及其主要分支血管，任何一支血管管腔直径狭窄≥50%确定为阳性病变。

1.2.3 ApoE基因多态性检测：用试剂盒提取病人清晨空腹血的白细胞基因组DNA，设计引物进行PCR来扩增编码112位和158位氨基酸的ApoE基因片段，再使用限制性内切酶AflⅢ和HaeⅡ消化PCR产物，经琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统扫描电泳结果，在标准分子量对照下鉴定不同个体的ApoE基因型。同时使用已知的ApoE2、ApoE3、ApoE4质粒为模板扩增ApoE基因片段，内切酶AflⅢ和HaeⅡ消化PCR产物进行对照。

1.2.4 其他生化指标的检测方法：以高效液相色谱(HPLC)法测定TC、TG水平，以超速离心结合ALBK法测定LDL-C、HDL-C水平，以胶乳增强免疫比浊法测定Lp(a)水平，运用碱性苦味酸法测定Cr水平。

1.2.5 SYNTAX评分：首先判断冠状动脉为左优势型或右优势型，再根据病变部位对左心室供血的范围进行加权，然后根据CAG下病变的具体特点进行打分，如血管阻塞的程度、数量、时间、长度以及是否有开口部阻塞等，最后将所有得分相加乘以权重即得到病人的SYNTAX评分情况。评分结果由2名冠脉方面的介入专家判读,结果不一致时由第3名医师分析确定。

2 结果

ApoE基因表现型分为3种，其中ApoE2表现型包括ApoE2/2和ApoE2/3基因型，ApoE3表现型包括ApoE3/3和ApoE2/4基因型，ApoE4表现型包括ApoE3/4和ApoE4/4基因型。由于ApoE2与ApoE4等位基因可表现出对CAD相反的作用，因此既往研究中常排除ApoE2/4基因型。在110个分析对象中，最终获得了109个样本符合基因型要求，排除1个ApoE2/4基因型的样本。

2.1 3组基线资料比较 3组间性别、年龄、高血压病史、糖尿病病史、高血脂病史、TC、TG、LDL-C、HDL-C、Lp(a)、Cr等方面差异没有统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2 ApoE基因表现型与SYNTAX评分的关系 3组之间SYNTAX评分差异具有统计学意义(P<0.05)。ApoE3组及ApoE4组SYNTAX评分显著高于ApoE2组(P<0.05)，而ApoE3组与ApoE4组相比，SYNTAX评分差异无统计学意义。见表1。

表1 各组病人基线资料比较

3 讨论

CAD是目前影响人类健康的重要疾病之一，其相关遗传易感基因多态性与CAD的关系逐渐被人们认识，其中ApoE基因多态性因可能引起血脂代谢异常而与CAD的发生发展显著相关。本研究中南京地区老年CAD病人基因表现型为ApoE2、ApoE3、ApoE4的病人比例分别为20.2%、65.1%和14.7%，与以往研究报道的3种基因表现型在中国人群中的比例分别为23.8%、65.3%和10.9%基本一致[2]。

本研究对冠状动脉严重程度的评估采用SYNTAX评分法，这是一种新型的按照冠状动脉解剖特点进行危险分层的积分系统，可以客观反映冠状动脉病变的严重程度，该评分方法很大程度地提升了本研究结果的可信度。有研究验证了SYNTAX评分在介入心脏病学中的应用是至关重要的，评分越高表示着心脏疾病的严重程度越高，预后越差。因此，SYNTAX评分不仅是一种血管造影工具，还在临床实践中对疾病严重程度的评估起着重要作用[3]。本研究发现，在年龄≥60岁的老年冠心病人群中，基因表现型为ApoE2、ApoE3、ApoE4的病人SYNTAX评分的均值分别为(7.75±7.62)分、(14.77±9.52)分和(15.53±7.14)分，组间比较提示ApoE基因表现型为ApoE2的人群发生CAD时冠脉病变的复杂程度低于ApoE3及ApoE4人群。既往研究提示，ApoE2等位基因对CAD具有保护作用[4]，而ApoE4等位基因的作用与之相反[5-7]。一项临床研究表明，ApoE3基因表现型者CAD的复杂程度显著高于其他基因表现型[8]；此外，另一项观察性研究表明，冠脉严重狭窄组中ApoE4基因表现型的比例高于轻度狭窄组，这两项研究的结果与本研究结果是一致的[9]。

本研究是一个单中心回顾性研究，可能存在选择偏倚。且病例数稍偏少，缺乏长期随访。上述结果仍需要更深入和大样本的研究来进一步证实。

综上所述，本研究涉及的南京地区老年CAD病人与全国ApoE基因表现型的分布基本一致，SYNTAX评分提示南京地区老年CAD病人基因表现型为ApoE3和ApoE4者的CAD复杂性高于ApoE2者。因此，ApoE的多态性对临床预测老年人群CAD的复杂程度具有重要意义，可作为CAD复杂性的预测因子。