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荧光素酶

  • 胆汁酸和 MAPK信号通路对 HepG2细胞中 PPARα转录表达的调控作用
    启动子区域的荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因系统在HepG2细胞中研究了ERK1/2、JNK1/2信号通路、FXR以及胆汁酸对hPPARα转录表达的调控作用,并进一步验证参与调控的顺式作用元件,为防治NAFLD的研究提供新思路。1 材料和方法1.1 细胞株及主要试剂人肝癌细胞HepG2购自中科院上海细胞库;人胚胎肾细胞HEK293T由广州大学精准基因编辑中心乔云波教授课题组馈赠;萤火虫荧光素酶报告基因质粒PGL4-UPRE-luc2P-Hygr

    山西医科大学学报 2023年10期2023-11-24

  • 生物发光成像技术在肿瘤细胞活体可视化研究中的应用研究进展
    LI通常采用荧光素酶报告系统。将荧光素酶报告基因置于目标基因启动子的控制之下，是构建荧光素酶报告系统常采用的方法。利用组织特异性甚至活性严格依赖于某个特定蛋白的启动子，可以在小动物体内根据荧光素酶的表达情况追踪某一细胞进程或跟踪该特定蛋白的转录活性。另一种方法是克隆荧光素酶基因的cDNA到靶基因位点上。与上述方法不同，这种方法可以做到可视化靶基因的表达，而不是其蛋白活性的变化。这两种方法都可以实现活体内生物学进程的实时无创成像。此外，成簇的规律间隔的短回文

    陕西医学杂志 2022年1期2022-12-08

  • 转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及鉴定
    内容。目前双荧光素酶报告基因系统是转录水平调控研究重要的实验方法。通过对启动子序列和活性的分析，验证启动子结合元件的反式激活能力，进而验证基因之间的转录调控关系[1]。乳腺癌现已超过肺癌，成为全球最常见的恶性肿瘤。而作为体表肿瘤，乳腺癌的转移是患者因癌症死亡的主要原因[2]。根据文献报道，在发育的乳腺中，催乳素(prolactin，PRL)所介导的PRL-JAK2-STAT5A是较经典的调控分子通路，可以调控乳腺发育、增殖、分化、泌乳等重要功能[3-4]。

    癌变·畸变·突变 2022年1期2022-02-15

  • 牛MMP9启动子与转录因子NF-κB作用的研究
    P9启动子双荧光素酶报告载体的构建从奶牛乳腺组织中提取DNA，在NCBI数据库中查找牛MMP9基因启动子序列。使用JASPAR、hTFtarget数据库预测转录因子P65（NF-κB的一个亚基）与MMP9启动子结合位点。设计引物，如表1所示，进行PCR扩增，获得4条逐级缩短的启动子片段。PCR产物通过凝胶电泳回收并纯化，与p GL3载体质粒分别使用Kpn I和Bgl II进行双酶切，连接、转化并测序。测序成功后的MMP9启动子双荧光素酶报告载体经扩大培养，

    中国乳品工业 2021年12期2022-01-21

  • 分子对接、CRISPR/Cas9 技术筛选并验证DNA ligase IV 抑制剂
    erase 荧光素酶报告载体结合CRISPR/Cas9-gRNA-T11 载体共转细胞，并根据分子对接的结果筛选与SCR7 作用类似的小分子化合物，接着检测各个孔中Firefly Luciferase的量，没有用小分子化合物处理时，萤火虫荧光素酶被截断的位置发生NHEJ 修复，不能得到大量有活性的萤火虫荧光素酶；经过小分子化合物处理，抑制了细胞内的NHEJ，提高了HDR 效率，能得到大量有活性的萤火虫荧光素酶。以期筛选到DNA ligase IV的抑制剂，

    湖北农业科学 2021年23期2022-01-08

  • chi-miR-128-3p和chi-miR-218对Nr1d2基因的靶向调控研究
    。1.2 双荧光素酶报告载体的构建用Premier 5软件设计包含结合位点片段的引物，并插入限制性XhoI或NotI酶切位点(引物见表1)，以全基因组DNA为模板，扩增出包含靶点的目的片段，利用胶回收试剂盒Gel Extraction Kit(Omega)纯化回收目的片段。将回收纯化的目的片段和骨架载体psiCHECHETM-2，用限制性内切酶Xho1和Not1切割，连接回收纯化后的切割产物，并转化到DH5a感受态细胞中，用AMP培养基筛选阳性菌落，挑取单

    家畜生态学报 2021年5期2021-06-09

  • 不同双荧光素酶方法对检测胃癌相关miRNAs靶向基因TIAM1的影响
    重要方式，双荧光素酶实验方法是现今最常用的研究miRNA 和靶基因直接作用关系的实验，双荧光素酶实验在荧光素酶质粒选择、抑制物/类似物（inhibitor/mimc）选择等细节方面各有不同[4，5]，尚无文献报道这些差异是否会影响其结果判断。为探索适合的双荧光素酶实验方法，本研究从胃癌细胞BGC823 基因组中提取了T-细胞淋巴瘤侵袭转移诱导基因（T-lymphom invasion and metastasis gene，TIAM1）的3’非编码区（3’

    中日友好医院学报 2021年1期2021-04-14

  • 双荧光素酶报告基因系统在家蚕基因启动子研究中的应用
    区域构建至双荧光素酶报告基因表达载体中，通过检测双荧光素酶报告基因系统荧光蛋白的酶活，从而分析目的基因启动子的转录活性，这是基因转录调控研究中常用且有效的手段之一[2]。家蚕是鳞翅目昆虫的模式生物，本文以家蚕基因启动子调控机制的研究为切入点，对双荧光素酶报告基因系统的工作原理与特点、研究和应用现状进行综述，有助于我们从细胞和分子层面理解昆虫生长发育过程的基因转录表达调控机制，为今后该系统在昆虫中的深入应用提供思考。1 双荧光素酶报告基因系统的发展历史荧光素

    广东蚕业 2021年1期2021-03-18

  • MEK5α 和MEK5β 调控Beclin 1 启动子
    8 h 进行荧光素酶报告基因检测实验.1.5 荧光素酶报告基因检测采用Promega 公司Dual Luciferase Reporter Assay System 进行荧光素酶报告基因测定,具体操作按说明书进行.1.6 Real-time RT-PCR使用TRIzol 试剂提取转染细胞总RNA,并将细胞总RNA 反转录合成cDNA(GENEray,GK8030-50)后用 real-time PCR(RT-PCR) 方法分析基因表达(GENEray,GK

    上海大学学报（自然科学版） 2021年3期2021-03-01

  • 脂联素对HepG2细胞中脂肪酸合成酶及激素敏感性脂肪酶基因启动子活性的影响
    SL启动子的荧光素酶表达质粒，探究脂联素对人肝癌细胞系(human hepatocarcinoma cell line)HepG2细胞中FAS及HSL启动子活性的影响，为进一步揭示脂联素调节肝细胞脂代谢的作用提供实验依据。1 材料与方法1.1 试剂与材料DMEM/NEAA培养基(Hyclone公司)；Opti-MEM减血清培养基(Gibco公司)；LipofactamineTM2000转染试剂(Invitrogen公司);微孔板发光分析仪(北京滨松光子技术

    基础医学与临床 2021年1期2021-01-18

  • miRNA let-7a靶向抑制ACVR1B表达
    -T载体、双荧光素酶报告载体pmirGLO购于北京Promega公司。1.2 主要试剂 TRIzol试剂、反转录试剂盒、SYBR Green PCR Master Mix、Lipofectamine2 000、Lipofectamine LTX and Plus试剂购于美国Invitrogen公司；DMEM培养基、胎牛血清、Opti-MEM培养基购于美国Gibco公司；限制性内切酶PmeI和SalI、T4 DNA连接酶购于美国NEB公司；Dual-Luci

    温州医科大学学报 2020年1期2020-12-24

  • 建立稳定表达荧光素酶的B16R细胞系
    出能稳定表达荧光素酶的B16R-FLUC细胞系，用化学发光的方法进行荧光素酶基因的鉴定，并用C57小鼠进行皮下移植黑色素瘤实验，用活体成像系统进行拍照观察，检测B16R-FLUC细胞的成瘤性，从而为黑色素瘤药物临床前的体外杀伤实验和体内抑瘤实验提供了新的实验方法，进而为临床前研究黑色素瘤的发病机制和判断药物治疗效果提供了全新的技术手段[3]。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物和细胞C57小鼠购于湖北省疾控中心，B16R细胞(北京协和医学院赠

    湖北科技学院学报(医学版) 2020年3期2020-07-17

  • 重组双荧光素酶报告基因质粒psiCHECK-2-Intron构建转染及转染细胞萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶表达
    ]。目前，双荧光素酶报告基因检测已成为研究转录因子参与基因调控的有效手段,通过对启动子DNA片段的分析，验证启动子结合元件的反式激活能力,探讨转录因子在信号转导中的分子机制[2]，在分子生物学中常用来研究基因功能、基因与基因间的调节、蛋白与基因的作用以及非编码RNA对基因表达的调控[3]。双荧光素酶报告基因检测中，海肾荧光素酶为报告基因，萤火虫荧光素酶为内参基因，两个荧光素酶基因都有自己的启动子、终止位点，二者独立表达且互不干扰[4]。常见双荧光素酶报告基

    山东医药 2020年9期2020-05-20

  • 构建表达膜锚定荧光素酶的载体实现细胞自发光成像*
    硌 张 鹏*荧光素酶(luciferase)是一类能催化荧光素或脂肪醛氧化产生生物发光的一类酶。根据来源不同，荧光素酶可分为细菌荧光素酶(bacterial luciferase，BL)、萤火虫荧光素酶(firefly luciferase，FL)、海肾荧光素酶(renilla luciferase，RL)和其他新型低分子量荧光素酶如Gaussia荧光素酶(Gaussia luciferase，GLuc)等。GLuc是从海洋桡足类动物Gaussia pri

    中国医学装备 2019年10期2019-10-23

  • 基于萤火虫荧光素酶报告基因检测凋亡的系统构建及鉴定
    春基于萤火虫荧光素酶报告基因检测凋亡的系统构建及鉴定车路平1, 2，栗永华1, 2，杨斌1, 2，徐智凯1, 2，廖瑛2，仇旭升2，谭磊2，孙英杰2，宋翠萍2，丁铲2，姚刚1，王金泉1，孟春春21 新疆农业大学 动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830052 2 中国农业科学院 上海兽医研究所，上海 200241为构建一个能够快速检测凋亡的含荧光素酶报告基因 (Fluc) 的真核表达质粒，采用PCR的方法将Caspase-3的识别基序Asp-Glu-Val-A

    生物工程学报 2019年8期2019-08-27

  • 家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定
    -Basic荧光素酶表达载体中，成功构建重组体报告基因质粒后，瞬转RK-13细胞，利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性。结果显示，克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性，为研究兔出血症病毒对宿主 IFN-β 基因的转录调控机制提供了有效的工具。关键词：家兔;兔出血症病毒;IFN-β基因;启动子;荧光素酶;转录调控中图分类号： S858.291 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2019）23

    江苏农业科学 2019年23期2019-03-03

  • 微光照亮前路萤火指引未来
    内的荧光素和荧光素酶反应后产生黄绿色荧光，这便是萤火虫的发光原理。值得一提的是，在发光的过程中，三磷酸腺苷（即ATP）中的化学能95%转化为光能，因此萤火虫的发光原理在科学技术上就有了很多重要的应用。例如冷光灯与生物光学成像等。冷光灯是一种采用冷光板作为光源材料的灯。同萤火虫一样，冷光灯在运转的过程中不会发热。由于它有功率小、照度高、基本不产热的优点，人们还称之为“绿色照明灯”。在现代，它以极快的速度被应用到社会的各个领域。可见萤火虫发光原理的这项应用的确

    小学生学习指导(中年级) 2018年12期2018-11-29

  • 肺癌细胞中CD59 rs79077373遗传变异对其转录活性的影响*
    V40以及双荧光素酶报告基因检测、凝胶回收、质粒提取试剂盒购自美国Promega公司，LipofectamineTM2000试剂购自美国Invitrogen公司，限制性内切酶KpnⅠ、NheⅠ和连接酶T4 DNA分别购自美国New England Biolabs和日本TaKaRa公司。A549、NCI-H2030、NCI-H23非小细胞肺癌细胞株购自美国菌种保藏中心。1.2 实验方法1.2.1 启动子区SNP筛选 对国际共享数据库Ensembl中基因CD5

    中国现代医学杂志 2018年30期2018-11-07

  • 一种适于家蚕细胞激素研究的双荧光素酶报告基因系统的内参质粒的构建
    8M两个载体荧光素酶活性的比较Fig.2 The comparison of luciferase activity between pRL-VgP78 and pRL-VgP78M.Renilla luciferase activity of pRL-VgP78 and pRL-VgP78M control reporter plasmid was detected at 24 h after transfection,the treatment con

    生物工程学报 2018年10期2018-10-25

  • 稳定表达荧光素酶基因的TC-1细胞系的构建
    瘤实验研究。荧光素酶(luciferase)报告基因作为一种常用的报告基因系统，在细胞中的背景非常低，生物荧光穿透力强，可用以标记肿瘤细胞，通过活体成像系统直接观察细胞在体内的生长、转移及对药物的反应等情况，并且能无创客观地对荷瘤模型的微小癌灶进行实时监测[3-4]。为此，作者构建了表达荧光素酶报告基因的慢病毒并感染TC-1细胞，通过筛选建立稳定表达荧光素酶基因的TC-1细胞株，为下一步构建可靠、直观、方便、灵敏的宫颈癌动物模型及相关研究提供示踪细胞来源。

    郑州大学学报（医学版） 2018年4期2018-08-01

  • 荧光素酶表达载体构建及其在巴斯德毕赤酵母的表达
    32）萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase，FL)能在O2、Mg2+、ATP存在条件下，催化D-荧光素转化为氧合荧光素并发出蓝绿荧光（550～580 nm）[1]。ATP生物发光反应产生的荧光强度在一定范围内与 ATP的量成正比，通过一定阶段恒定的ATP的量可以反映细菌等微生物的数量，该方法与传统的细菌培养菌落计数法有良好的相关性[2]，由于ATP生物发光具有高灵敏度、检测简便等优点，该方法已广泛应用于食品工业各个领域。此前本实验室在荧光素

    现代食品科技 2018年6期2018-07-11

  • 基于CXCR4启动子的中药有效成分高通量筛选细胞模型构建和应用
    bp）插入荧光素酶报告基因载体pGL4.17-Basic中，构建重组质粒pGL4.17-CXCR4，与内参质粒pRL-TK共转染293细胞，经验证CXCR4启动子转录活性后，单细胞克隆培养以获得稳转细胞株，并用于候选中药单体1～10的筛选，最后应用Western blot验证所筛选出的中药单体促进间充质干细胞（MSCs）中CXCR4表达的作用。结果 成功建立药物筛选细胞模型，筛选出候选单体6提高CXCR4启动子活性的作用最强，Western blot结果

    中国中医药信息杂志 2018年11期2018-01-05

  • 稳定表达人α-分泌酶adam10基因启动子荧光素酶报告基因细胞系的构建研究
    0基因启动子荧光素酶报告基因细胞系的构建研究唐 颖，胡小童，朱炳林，韩 宇△(重庆医科大学附属第一医院神经内科 400016)目的构建携带adam10基因启动子的荧光素酶报告载体，筛选稳定表达细胞系并分析其活性。方法提取人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)基因组DNA，以其为模板，PCR扩增adam10基因启动子并克隆至荧光素酶报告载体pGL4.17中，构建adam10基因启动子荧光素酶报告载体pGL4.17-adam10，将其转染SH-SY5Y细胞(

    重庆医学 2017年28期2017-11-08

  • TGFβR3基因3’UTR双荧光素酶报告载体的构建及其与miR-let-7a靶向关系的验证
    3’UTR双荧光素酶报告载体的构建及其与miR-let-7a靶向关系的验证周欢栋，顾睿，吴大洲，陈肖鸣（温州医科大学附属第一医院 小儿外科，浙江 温州 325015）目的：构建 III型转化生长因子β受体（TGFβR3）基因3’非编码区（3’UTR）双荧光素酶报告载体，并分析其与miR-let-7a的靶向关系。方法：根据microRNA靶基因预测软件targetscan获取miR-let-7a与TGFβR3基因3’UTR潜在的互补结合位点；PCR扩增出TG

    温州医科大学学报 2017年5期2017-06-21

  • 靶向猪CLTC基因miRNA的预测与验证
    TR克隆至双荧光素酶报告基因载体psiCHECK2中获得双荧光素酶报告基因重组载体psiCHECK2-CLTC-3′UTR。将预测得到的miRNA分别和重组载体psiCHECK2-CLTC-3′UTR共转染到细胞中，以乱序序列作为阴性对照（NC），检测miRNA对重组质粒荧光素酶活性的影响。结果发现miR-205，miR-1，miR-129-5p和miR-206均能够显著抑制荧光素酶活性（P＜0.05）。在猪肾上皮细胞系PK15细胞中超表达miR-1和mi

    浙江农林大学学报 2017年3期2017-06-19

  • 稳定表达人BACE1启动子及荧光素酶报告基因HEK293细胞株的建立*
    E1启动子及荧光素酶报告基因HEK293细胞株的建立*邓常青1,2，朱炳林1，龙 艳1，罗 伟1，陈国俊1△(1.重庆医科大学附属第一医院神经病学重点实验室，重庆 400016；2.重钢总医院重症医学科，重庆 400037)目的 对人β位点裂解酶-1(BACE1)基因核心启动子进行克隆，构建携带BACE1基因启动子的荧光素酶报告载体，筛选稳定表达细胞株并分析其转录活性。方法 提取人胚肾HEK293细胞基因组DNA，以其为模板，PCR扩增BACE1核心启动子

    重庆医学 2017年3期2017-02-10

  • C3启动子克隆及荧光素酶报告基因载体构建
    启动子克隆及荧光素酶报告基因载体构建Salman Naseer1，Shahid Khan1，M Imran1，何冰2，林佳2（华北理工大学 1. 国际教育中心，2. 生命科学学院，河北 唐山 063000）为克隆C3基因启动子序列，构建C3基因启动子荧光素酶报告基因载体，运用PCR的方法从血液中提取到的基因组DNA中获得目的基因，双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体上，构建C3基因启动子报告基因载体．构建的pGL3-Basic-C3-promotor重组质粒

    高师理科学刊 2016年11期2016-12-15

  • 双报告基因标记乳腺癌细胞移植瘤模型的建立及活体成像研究
    eGFP）和荧光素酶（Fluc）融合基因标记人乳腺癌MDA-MB-231细胞，利用流式细胞术筛选建立稳定细胞系，利用荧光显微镜和流式细胞术检测转染率，体外细胞成像检测Fluc的表达；将转染后的231细胞接种至NOD/SCID小鼠皮下建立移植瘤模型，活体成像监测移植瘤Fluc的发光。结果 荧光显微镜下观察建立的稳定细胞系中GFP表达率高，流式测定表达率95.2%，传代扩增5次后表达率无明显变化。体外细胞成像检测到明显的Fluc发光，信号强度与细胞数成正比。所

    医学信息 2016年29期2016-11-28

  • Nfic基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-20a靶向关系的验证
    3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-20a靶向关系的验证王珊1，2，李晓霞2，周杰1，王宝利1△目的构建核因子C（nuclear factor I-C，Nfic）基因3′非编码区（3′UTR）荧光素酶报告质粒，利用双荧光素酶报告基因验证microRNA-20a（miR-20a）与其潜在靶基因Nfic的靶向关系。方法通过microRNA靶基因预测软件Targetscan获取miR-20a与Nfic基因3′UTR潜在的互补结合位点；PCR扩增出Nf

    天津医药 2016年9期2016-10-20

  • Prss37 基因转录起始位点的确定及其转录调控的初步探讨
    kb）驱动的荧光素酶基因表达的质粒；通过受精卵雄原核显微注射技术获得上述三种启动子驱动荧光素酶基因表达的转基因小鼠；利用活体成像技术观察荧光素酶基因的表达，明确启动子的组织特异性。结果Prss37基因的转录起始位点位于NCBI GeneBankTM （NM_026317.2）报道序列上游的40 bp处； 成功获得三种转基因小鼠，其中1 kb启动子驱动的转基因小鼠检测到荧光素酶基因的表达，且在脑、睾丸和附睾组织中的表达较强。结论明确Prss37的转录起始位点

    实验动物与比较医学 2016年2期2016-10-06

  • miR-20b直接靶向3′-UTR负性调节VEGF的表达*
    TM质粒海肾荧光素酶的下游，得到pmiR-RB-ReportTM-VEGF 3′-UTR双荧光素酶重组质粒，使用电泳法和测序法进行验证；将重组质粒或空质粒与miR-20b模拟物或其对照共转染HeLa细胞，24 h后检测相应荧光素酶活性。结果VEGF 3′-UTR存在miR-20b的结合位点；获得了含VEGF 3′-UTR的双荧光素酶报告载体；重组质粒与miR-20b模拟物共转染组HeLa细胞的荧光素酶活性明显低于空质粒转染组(P关键词：血管内皮生长因子；3

    华中科技大学学报（医学版） 2016年1期2016-03-10

  • 双荧光素酶报告基因系统检测CYP3A4*1G增强CYP3A4表达的调控作用*
    0052双荧光素酶报告基因系统检测CYP3A4*1G增强CYP3A4表达的调控作用*杨卫红1), 闫良2), 刘利娥3), 赵登职4), 张卫5), 张莉蓉2)#1)郑州大学基础医学院法医学系 郑州 4500012)郑州大学基础医学院药理学系 郑州 4500013)郑州大学公共卫生学院卫生化学与卫生检验系 4500014)郑州颐和医院药学部 郑州 4500475)郑州大学第一附属医院麻醉科 郑州 450052关键词CYP3A4*1G;CYP3A4启动子;

    郑州大学学报（医学版） 2015年6期2016-01-29

  • TNF-α 3′-UTR双荧光素酶报告基因系统的构建及丹参酮类药物筛选
    ′-UTR双荧光素酶报告基因系统的构建及丹参酮类药物筛选韦忠红1,2，朱智杰1,2,刘玉萍1,2，刘兆国1,2，盛晓波1,2，汪思亮1,2，陶丽1,2，祝娉婷1,2，陈文星1,2,王爱云1,2，陆茵1,2(1.南京中医药大学药学院,2.江苏省药效与安全性评价重点实验室,江苏 南京210046)中国图书分类号：R284.1；R329.2；R345；R394.2；R394.3；R965.1；R977.3摘要:目的构建并鉴定pGL3-TNF-α 3′端非翻译区(

    中国药理学通报 2015年1期2016-01-11

  • 速激肽受体1基因启动子近端E盒点突变对下游基因调控的影响
    点突变，通过荧光素酶报告基因载体［3］，研究E盒结构的突变是否会影响下游基因的表达。1 材料和方法1.1 材料胎牛血清(Fetal bovine serum.FBS)与 DMEM/F12培养液购自美国Hyclone公司;胰酶消化液购自北京天润善达生物制品有限公司;Promega限制性核酸内切酶:mluⅠ、HxoⅠ，LB 液体培养基(pH7.4)与动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒(D1700)购自北京索莱宝科技有限公司;Biospin胶回收试剂盒BSC0

    山西医科大学学报 2015年6期2015-12-16

  • 转录因子KLF6对大鼠趋化因子CCL5基因启动子活性的影响及其可能的结合部位
    全长和截短）荧光素酶报告质粒，检测大鼠肾小球系膜细胞（g1omeru1ar mesangia1 ce11，GMC）中过表达Kruppe1样转录因子6（Kruppe1-1ike factor 6，KLF6）对CCL5基因启动子活性的影响。同时，筛选KLF6与CCL5基因启动子区的结合位点。方法：采用PCR技术，将扩增出的大鼠CCL5基因启动子全长序列（-1744nt～-14nt）插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中，获得CCL5基因启动子全长荧光素

    江苏大学学报（医学版） 2015年6期2015-11-21

  • MicroRNA-195与Smad7靶向关系的研究
    -UTR区的荧光素酶报告基因载体，利用双荧光素酶报告基因验证MicroRNA195与其潜在靶基因Smad7的靶向关系。方法：PCR扩增出Smad7基因3′-UTR区片段，以此构建含3′-UTR的荧光素酶报告基因载体（wild type，WT）；将miRNA-195与荧光素酶报告重组子共转染至293T细胞中，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性；构建含Smad7基因3′-UTR突变体（mutant，Mut）的荧光素酶报告基因质粒，检测荧光素酶活性变化。结果

    江苏大学学报（医学版） 2015年4期2015-07-22

  • 携带GFAP启动子的慢病毒载体介导外源基因在肝星状细胞的特异表达
    启动子介导的荧光素酶的慢病毒载体，检测体内外靶向肝星状细胞的外源基因表达的特异性和效率。方法通过报告基因实验筛选介导效率较高的GFAP启动子，以CMV启动子作为阳性对照分别介导荧光素酶在小鼠肝星状细胞（JS1）、人肝星状细胞（LX-2）及人肝细胞（L-02）中的表达。通过尾静脉注射将包装的慢病毒注射到四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠体内，通过活体成像和Western blot检测慢病毒颗粒在小鼠体内的分布，并通过免疫双荧光染色检测肝星状细胞的特异表达。结果人GF

    复旦学报(医学版) 2015年5期2015-06-01

  • CLPTM1L与miR-494靶向关系的双荧光素酶报告实验验证
    靶向关系的双荧光素酶报告实验验证张 仁，张圣洁，张学研，李 彤，臧文巧#郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室 郑州 450001#通信作者，女，1979年8月生，博士，副教授，研究方向：食管癌病因学，E-mail: zangwenqiao@sina.commiR-494; CLPTM1L; 双荧光素酶报告系统目的：确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法：采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CL

    郑州大学学报（医学版） 2015年3期2015-04-18

  • 靶向猪ATGL 基因的miRNA预测及鉴定
    ，最终利用双荧光素酶报告基因法来检测荧光素酶活性。试验成功构建了含猪ATGL基因3′UTR序列的重组载体pMIR-ATGL-3′UTR，双荧光素酶报告基因试验显示ssc-miR-769-3p、ssc-miR-1343、ssc-miR-7137-3p、ssc-miR-671-5p、ssc-miR-149能下调293T细胞中pMIR-ATGL-3′UTR的荧光素酶活性，而点突变试验证实了ssc-miR-1343与ssc-miR-7137-3p能通过与猪ATGL

    畜牧兽医学报 2015年8期2015-03-22

  • B7-H1启动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性检测
    -H1启动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性检测吴胜昔1，陈永文2，朱广倍1，费 蕾2，吴玉章2*(1.重庆理工大学 药学与生物工程学院， 重庆 400054； 2.第三军医大学 基础部 免疫学教研室，重庆 400017)目的构建含B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体，转染肝癌HepG2细胞进行活性检测。方法PCR扩增B7-H1启动子上游区域基因片段，并插入到含有荧光素酶报告基因的载体PGL3-Basic中构建重组子，经双酶切和测序鉴定后，将重组子转染H

    基础医学与临床 2014年7期2014-11-27

  • 以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的基因表达上调剂筛选模型的建立与初步应用
    -T15，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶的表达活性。对瞬时转染条件进行优化，以豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯作为阳性对照来评价模型的有效性，并利用该细胞模型对本研究所的化合物库进行筛选。构建了重组荧光素酶报告基因质粒 pGL4.17-INGAP，并成功转染 HIT-T15 细胞株。对模型进行优化后，应用阳性对照对其进行评价，Z' 因子为 0.57，适用于进行高通量筛选。用该模型筛选了本所化合物库，其中白藜芦醇显示出较好的上调作用，EC50为 1.6 μg/ml

    中国医药生物技术 2014年5期2014-11-01

  • 基于双荧光素酶报告基因系统建立miR-140生物传感器
    活性的缺点，荧光素酶报告基因表达系统是一种能够检测miRNA活性的生物传感器。本研究旨在利用双荧光素酶报告基因构建miR-140生物传感器，并进行初步应用研究。1 材料与方法1.1 主要材料SD大鼠由南京青龙山实验动物中心提供；psiCHECK-2载体为本课题组实验室保存；引物由上海生工生物工程公司合成；反转录试剂盒、实时定量PCR试剂盒、T4 DNA连接酶、限制性内切酶XhoⅠ、NotⅠ购自TaKaRa公司；microRNA由上海吉玛制药技术有限公司合成

    东南大学学报（医学版） 2014年2期2014-09-13

  • Bcl-6基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-346靶向关系的验证
    3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-346靶向关系的验证陈娟，袁靖，吴晶晶，田洁，汤新逸，芮棵，田新宇，张悦，刘海冰，耿丽娜，杨珺，许化溪，王胜军（江苏大学检验医学研究所，江苏镇江212013）目的：构建Bcl-6基因3′非编码区（3′untranslated region，3′UTR）荧光素酶报告质粒，分析miR-346对Bcl-6的调控作用。方法：通过PicTar数据库和miRanda数据库预测可能与Bcl-6基因3′UTR作用的miRNA

    江苏大学学报（医学版） 2014年2期2014-08-04

  • 胶质瘤细胞中miR-223对PAX6基因3'非翻译区的调控作用＊
    '-UTR双荧光素酶报告基因质粒，验证miR-223与PAX63'-UTR的靶向关系，为进一步研究miR-223对PAX6的调控作用奠定实验基础。1 材料与方法1.1 材料DMEM高糖培养基(Hyclone公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)，psiCHECKTM-2载体(Auragene公司)，Not I、Xho I内切酶和 T4连接酶(Fermentans公司)，DH5α感受态细胞(Auragene公司)，琼脂糖(西班牙Biowest公司)，质粒小提试剂

    激光生物学报 2014年1期2014-06-14

  • 胰腺癌PANC1细胞microRNA-217靶基因ANLN的鉴定
    细胞，采用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性，采用蛋白质印迹法检测ANLN蛋白的表达。结果转染psiCHECK-2-ANLN、psiCHECK-2-ANLN+miR-217、psiCHECK-2-ANLN+miR-217 inhibitor、psiCHECK-2-ANLN+NC、psiCHECK-2-ANLN+NC inhibitor各组间的荧光素酶活性分别为2.221±0.188、0.769±0.061、3.764±0.371、2.265±0.201、2

    中华胰腺病杂志 2013年3期2013-10-19

  • 人乳腺癌上皮细胞miR-217对EZH2表达的调控作用
    blot和双荧光素酶报告基因等一系列实验方法，进一步研究乳腺上皮细胞系中miR-217与EZH2之间的作用机制，为miR-217作为乳腺癌潜在治疗靶点的体外研究提供实验依据。1 材料与方法1．1 材料 人正常乳腺上皮细胞系HBL-100，乳腺癌上皮细胞系 MCF-7、MDA-MB-231，人胚肾细胞293T。DMEM高糖培养基。0．25%胰蛋白酶、青—链霉素(10 000 U/mL)。胎牛血清。TRIzol。逆转录试剂盒。实时定量PCR用 2×Mix、Sy

    山东医药 2013年43期2013-07-05

  • NOTCH1基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
    一种改良的双荧光素酶报告质粒以更加准确评价miRNA靶向调控基因的荧光素酶的活性。我们成功构建了含NOTCH1基因3'非编码区(3'untranslated region，3'－UTR)双荧光素酶报告载体，预测出负性调控NOTCH1基因表达的miRNA，并证明了 miRNA－34a能够负性调节 NOTCH1的表达。1 材料与方法1．1 主要试剂和仪器 人胚肾上皮细胞系293T细胞为本实验室保存;质粒 pmir－RB－REPORTTM(广州锐博公司产品);h

    中国免疫学杂志 2013年3期2013-06-21

  • 人高密度脂蛋白受体基因3'UTR 对其mRNA 稳定性的影响
    长片段克隆至荧光素酶报告基因的下游，构建受 SR-BI/ CLA-1 基因 3'UTR 调控的重组荧光素酶报告质粒 pc-luc-3'UTR 以及 pGL3-CLAp-luc-3'UTR，并获得了稳定转染 pGL3-CLAp-luc-3'UTR 的 HepG2 细胞的单克隆细胞株，为进一步研究 SR-BI/CLA-1 表达调控机制以及针对人 SR-BI/CLA-1 基因 mRNA 稳定性的表达上调剂高通量筛选模型的建立奠定了基础。1 材料与方法1.1 材料

    中国医药生物技术 2013年1期2013-04-20

  • 小鼠DUSP1 3'-UTR双荧光素酶报告基因表达系统的建立及功能鉴定
    '-UTR双荧光素酶报告基因表达载体，并对其功能进行了鉴定。1 材料与方法1.1 主要材料及试剂 真核表达载体pGL3-control、pRL-TK、pCDNA3.1、pcDNA3.1-HuR-FLAG、大肠埃希菌DH5α、NIH3T3和RAW264.7细胞(美国ATCC)，24孔板和细胞培养皿(Corning 公司，美国)，DMEM培养液和胎牛血清、总RNA提取试剂Trizol(Invitrogen公司，美国)，DNA ladder、KOD Plus D

    解放军医学杂志 2013年4期2013-04-01

  • 猪繁殖与呼吸综合征病毒相关猪microRNA的初步筛选
    A聚合酶；双荧光素酶载体psiCHECKTM－2、双荧光素酶检测试剂盒，购自Promega公司。1.3 miRNA、PRRSV 3′utr和引物的合成 人工合成ssc－miR－323、ssc－miR－105－1及两者的抑制物inhibitor，由上海吉玛制药技术有限公司合成，同时合成阴性对照miRNA Control及相应抑制物inhibitor control。根据GenBank中公布的PRRSV JXA1株基因序列（GenBank登录号：EF11244

    中国兽医杂志 2012年3期2012-11-23

  • 多发性骨髓瘤细胞中c-myc介导的CKS1B转录调控的研究
    酶切分别插入荧光素酶报告基因pLG4.70和PCMV6-XL5载体。最终形成如下质粒：c-myc表达质粒：PCMV6-XL5wtmyc，插入含3.8 kb的c-myc cDNA;对照质粒PCMV6-XL5，不含插入片段;CKS1B启动子报告基因质粒pGL4.70(1000)，含1000 bp CKS1B启动子序列，连接萤火虫荧光素酶报告基因。1.2.2 质粒转染：24孔板内接种0.5×105/孔MM细胞XG1及XG7，37℃、5%CO2培养过夜后进行转染。

    实用老年医学 2012年3期2012-02-08

  • -514 bp及-250 bp位点基因多态性对肝脂酶转录活性的影响
    异纯合子型的荧光素酶表达质粒对HL转录活性的影响。方法：PCR法扩增含不同目的基因的DNA片段，将目的基因插入到pUCm-T质粒中，获取含SacI及BglⅡ酶切位点的目的基因，将该基因与含荧光素报告基因的pGL2质粒相连，构建pGL2-HL/-514T+-250A变异纯合型以及pGL2-HL/-514C+-250G野生型荧光素酶表达质粒，转染至HepG2细胞内表达，双荧光素酶检测系统检测不同重组质粒荧光素酶报告基因的活性。结果：（1）实验成功构建了同时含H

    天津医药 2012年8期2012-01-05

  • 靶向奶牛Lepr基因的miR-30d报告基因载体构建及靶向验证
    iR-30d荧光素酶报告基因载体，验证奶牛乳腺中瘦素受体基因（Lepr）是否为miR-30d的生物学靶基因。将microRNA荧光素酶表达报告载体特异性改造，使其含有TargetScan预测的与miR-30d靶向结合的奶牛Lepr基因序列，对miR-30d与重组荧光素酶载体质粒共转染后的细胞裂解液进行荧光素酶活性检测分析。结果表明，靶向奶牛Lepr基因的miR-30d荧光素酶表达报告载体构建成功，奶牛Lepr基因是miR-30d的靶基因，旨为miR-30d

    中国乳品工业 2011年5期2011-01-08

  • 影响启动子活性测定的关键影响因素
    学发光法测定荧光素酶,EGFP荧光强度采用流式细胞仪。以上检测每组样品均设三复孔,并重复两次,所得结果进行t检验。结果选择不同的报告基因、载体、质粒转染剂量、启动子长度和细胞系得到不同的结果。结论载体、质粒转染剂量、启动子长度、细胞系的选择会对启动子分析的结果造成很大的影响,因此,在进行启动子分析前,应综合考虑上述因素,以达到更好的实验效果。启动子;报告基因;荧光素酶;绿色荧光蛋白(Chin J Lab Diagn,2010,14:1017)真核基因的启动

    中国实验诊断学 2010年7期2010-08-21

  • 用于筛选组蛋白去乙酰化酶抑制剂细胞模型的验证
    gen公司;荧光素酶检测试剂盒(Luciferase Assay System)购自Promega公司;TD20/20光度计由美国Turner Designs公司生产;非洲绿猴肾成纤维细胞COS-7细胞由本实验室保存。1.2 转染细胞模型的制备前期工作发现了2种可以被HDAC抑制剂特异性活化的启动子序列，通过采用分子克隆的方法构建了含有该启动子序列及荧光素酶报道基因的真核表达载体，将其命名为pTA1及pTA2［5］。将COS-7细胞按1×105接种于24孔

    中国药理学与毒理学杂志 2010年4期2010-05-14

  • 细胞因子调节垂体M tT/S细胞中人生长激素基因启动子的活性
    。方法:采用荧光素酶报告基因的方法。首先建立含hGH基因启动子（-484～30 bp）和荧光素酶融合基因的稳定转化MtT/S细胞系,然后用细胞因子刺激,检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量,反映它们对GH分泌和合成的影响;检测MtT/S细胞内荧光素酶的变化,说明细胞因子对hGH基因启动子活性的作用。将Pit-1蛋白表达质粒（pcDNA-pit-1-cDNA）单独转染或与Pit-1反义寡核苷酸（Pit-1OND）共转染于稳定转化的M tT/S细胞中,观察加

    中国免疫学杂志 2010年2期2010-02-06

  • Mir-106b对阿尔茨海默病昼夜节律调控的初步研究
    。1.8 双荧光素酶报告检测根据 Targetsan、Pictar、m iRanda等靶基因预测软件，预测mir-106b与NPAS2 3’UTR的结合位点。PCR扩增NPAS2的3’UTR（包含与m ir-106b的预测结合位点并带Xho I和Not I两个酶切位点），将PCR扩增产物克隆到 pMDTM18-T载体，命名为 TNPAS2-3’UTR。突变预测与 mir-106b结合位点的碱基，构建突变的 pMDTM18-T载体.根据 Targetsan的

    中国比较医学杂志 2010年4期2010-02-01

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